正己烷慢性吸入小鼠实验模型建立论文

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1、正己烷慢性吸入小鼠实验模型建立论文张大勇，黄中新，曹静婷，程欣，陈瑛【摘要】目的建立正己烷慢性吸入染毒的动物实验模型，为研究正己烷长期吸入的毒理损伤机制提供实验方法。方法24只昆明小鼠，随机分为4组（正常对照组、染毒4，8和12周组）.freel3。染毒结束后，取血标本测正己烷浓度；取肺、肝和肾组织常规固定，包埋，光镜观察结构变化。结果各染毒组小鼠血液中正己烷平均浓度均已明显高于正常对照组，已达到染毒要求。镜下观察实验小鼠的肺、肝和肾均出现病理变化，并随染毒时间延长呈病理改变加重趋势。结论本实验采用的昆明小鼠正己烷静式染毒方法，已造成实验小鼠主要代谢器官进行性损伤

2、，可作为研究正己烷毒理损伤机制的参考模型。【关键词】正己烷正己烷（nhexane）属饱和脂肪烃类，是一种常用的有机工业溶剂。其价格低廉，在印刷、油漆、电子器材清洗等行业中被广泛使用。近年来，长期接触正己烷引起的慢性中毒事件屡有发生，且有不断增多趋势〔1，2〕。正己烷对机体损伤过程，是一个长期接触后的慢性中毒过程。而以往的正己烷动物染毒实验模型，主要是急性正己烷损伤模型，而且规格和方法均不统一，不能很好的观察正己烷慢性吸入后其主要代谢器官产生的损伤变化。本文建立的正己烷慢性吸入致昆明小鼠器官损伤的实验模型，为进一步研究正己烷慢性吸入产生的损伤作用及其可能的作用机制

3、提供实验方法。1材料与方法11材料选用清洁级昆明小鼠(广东省实验动物中心，合格证号：2004A021)共24只，体重（20±10）g。正己烷为分析纯（天津市化学试剂一厂，批号：050606）。12自制染毒装置染毒箱规格：50cm×50cm×100cm，总体积为250L。材料为有机玻璃，箱顶部配有小功率电扇一部和正己烷添加孔，箱正面有一个鼠笼进出口（25cm×25cm）。13实验动物分组24只昆明小鼠随机分为正常对照组和3个染毒组，每组6只（雌雄各半）。染毒组按染毒时间长短分为4，8和12周3组。14染毒剂量和方法采用静式染毒模式,染毒箱内平均初始浓度为1

4、76g/m3。每周染毒6d，每天置小鼠于染毒箱内8h，即8～12时和13～17时，其余时间小鼠置于染毒箱外正常环境。第7d，各组实验小鼠置正常环境中喂养。对照组小鼠放入同样规格另一染毒箱中，操作过程同实验组，但不接触正己烷。15血样和组织标本的采取各组小鼠分别在第4，8和12周末实验结束后半小时内取血，并及时用气相质谱-色谱仪检测正己烷浓度。采血后取小鼠的肺、肝、肾等主要器官组织，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋和常规苏木素-伊红（HE）染色。2结果21中毒表现染毒组吸入2周后表现行动逐渐滞缓，4周后毛色变差，进食量逐渐减少。随着染毒时间延长，染毒组小鼠上述中毒表

5、现逐渐加重，且体重逐渐减轻。但全部染毒组小鼠至取材时无一意外死亡。对照组健康小鼠，喂养期间无明显异常。22血液中正己烷浓度检测染毒组4,8,12周全血标本中正己烷平均浓度分别为67833，77667和43000μg/L,明显高于对照组(01μg/L)，达到染毒要求。23显微镜观察对照组小鼠肝、肺、肾结构正常，未见明显病理变化。染毒组小鼠的肝、肺和肾结构均逐渐出现病理变化，且随着染毒时间的延长，变化呈不断加重趋势。(1)肝脏：肝细胞体积增大，胞浆疏松。随染毒时间延长，嗜酸性变的肝细胞数量增多，集中于中央静脉周围（图1）；肝细胞脂肪性变的数量也逐渐增多，较

6、集中在肝小叶边缘部位，12周组中大量肝细胞内出现较大脂肪滴（图1B）。(2)肺脏：肺部出现炎症，随着染毒时间延长，肺泡隔和细支气管周围细胞的浸润逐渐增多，且出现代偿性肺气肿，部分肺泡扩张并间隔断裂，逐渐融合成较大的囊腔（图2A）。12周组中炎症细胞浸润严重，肺泡隔明显增厚（图2B）。(3)肾脏：染毒8周组肾小管上皮出现嗜酸性变细胞，12周组嗜酸性变细胞明显增多（图3A），12周组肾小管水肿明显，部分集合管上皮出现嗜酸性变细胞，腔内有少量分泌物和蛋白管型（图3B）。图1染毒8周(A)及12周(B)肝脏病理变化（HE染色，10×20）（略）图2染毒4周(A)及12周(

7、B)肺脏病理变化（HE染色，10×20）（略）图3染毒12周(A)、(B)肾脏病理变化（HE染色，10×20）（略）3讨论“正己烷在正常环境中主要由肺吸入，经肝脏代谢后由肺和肾排出体外。实验报道，急性吸入可以造成肺、肝和肾等代谢器官损伤〔2〕。”本实验根据毒理学实验设计相关文献〔3，4〕，参考以往正己烷研究文献〔5〕，进行实验条件和初始浓度设计，目的在于尽量模拟生产作业的接触方式，构建正己烷慢性吸入动物模型，观察其主要代谢器官的形态学改变。实验结果证实，实验设计较为合适，3组染毒小鼠在整个染毒过程中无一意外死亡。染毒小鼠全血标本中正己烷浓度均达到染毒要求，各组染毒

8、小鼠的肺、