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《体内转导HBVcccDNA法建立HBV慢性感染的小鼠模型-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、260中华肝脏病杂志2014年4月第22卷第4期ChinJHepatol,April2014,Vo1.22,No.4·病毒肝炎·体内转导HBVc~DNA法建立HBV慢性感染的小鼠模型赵婷婷李小松殷文伟蔡雪飞张文露陈飞兰赖国旗黄爱龙【摘要】目的通过体内转导乙型肝炎病毒(HBV)cccDNA,建立持续表达HBV抗原的小鼠乙型肝炎模型。方法取l0只裸小鼠,将HBVcccDNA以3g/只、2g/只、1g/只分别注射实验组,同时以2rnl等渗盐水注射空白组,分别于第1、3天,第1、2、3、4、5、6、8、10周进行尾静脉采血。用放射免疫法检测血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝
2、炎e抗原(HBeAg)浓度的变化;荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBVDNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBV抗原特异性l苏木素一伊红(HE)染色观察肝组织病理变化。使用SPSS17.0对数据间相关性进行线性相关分析。结果小鼠在注射cccDNA后,从第1天开始于血液中检测到HBsAg和HBeAg的表达,两者均于第1周内迅速升高达到最高值,并持续至第10周;其中HBsAg的表达水平经历了两个先上升再下降的过程(第4周为较低水平,第8周为较高水平),而HBeAg的表达水平经历了三个先上升再下降的过程(第2周、第4周为较低水平,第3周、第6周为较高水平);荧光定量PCR结果
3、表明,10周后肝组织中HBVDNA的拷贝数随着高、中、低剂量组而递减,每克肝组织中HBVDNA拷贝数[(1.14E+07)±(6.51E+06)、(9.81E+06)±(9.32E+06)、(3.72E+06)±(2.35E+06)]与注射的cccDNA浓度(1.5、1.0、0.5/.tg/m1)呈正相关(皮尔森相关系数,=0.979)。10周后血清中HBVDNA的拷贝数为中剂量组最高,其次为高剂量组,同时,各组血清中的HBVDNA拷贝数较肝组织中的低;免疫组织化学结果显示,实验组裸小鼠肝组织中存在HBsAg和HBcAg的表达,HE染色结果显示肝组织脂肪样或空泡样变性严重,肝
4、小叶组织结构不明显。结论本研究利用HBVcccDNA质粒体内转导裸小鼠,成功建立了HBV在肝组织稳定复制并持续表达HBV抗原的裸小鼠模型,为进一步研究HBVcccDNA慢性持续感染的机制和抗病毒治疗打下基础。【关键词】肝炎病毒,乙型;DNA,共价闭合环状;水动力注射;持续感染EstablishmentofanHBVchronichepatitisBinfectionmousemodelbyvivotransductionofHBVcccDNAZhao7~ngting*LiXiaosong,IqnWenwei,CaiXuefei,ZhangWenlu,ChenFeilan,La
5、iGuoqLHuangAilong.*LaboratoryAnimalCenter,KeyLabora~ryofMolecularBiologyonInfectionDiseasesandInstituteforHralHepatitis,ChongqingMedicalUniversi~,Chongqing400016ChinaCorrespondingauthor:LaiGuoq~Email:a68895078@21cn.comCo-correspondingauthor:HuangAilong,Emil."ahuang1964@163.corn[AbstractlObj
6、ectiveTogenerateamousemodelofchronichepatitisB(CHB)infectionbyperforminginvivotransductionofhepatitisBvirus(I-IBV)covalentlyclosedcircular(ccc)DNA.MethodsNudemicewereectedwithHBVcccDNAatdosesof1.5,1.0or0.5gg/m1.Acontrolgroupwasgeneratedbygivingequalinjectionvolumesofph3siologicalsaline.Thes
7、erumlevelsofhepatitisBsurfaceantigen(HBsAg)andhepatitisBeantigen(HBeAg)Oilpost-injectiondays1and3,weeks1-6,8and10wereassayedbyreflectionimmunoassay.Atpost一ectionweek10,allanimalsweresacrificedandlivertissueswerecollected.CopiesofHBVDNAinserumandlivertiss
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