用igh、tcr基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变

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1、用IgH、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变作者：钟梅,吕亚莉,李冰,赵坡【摘要】　　目的探讨IgH、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变的意义。方法采用IgH、TCRβ、TCRγ基因重排标志检测，36例经常规HE、免疫组化不能诊断的疑难淋巴组织增生性病变，并进行克隆性分析。结果29例淋巴组织增生性病变呈克隆阳性，其中IgH、TCR双重排阳性者为13例，IgH单一阳性8例，TCR单阳性为8例。克隆阳性病例与免疫组化结果一致的为24/29例，7例阴性者，4例为反应性增生，2例经随诊为猫抓病淋巴结炎，1例为不典型增生。结论IgH、TCR基因重排技术对于疑难淋巴组

2、织增生性病变的诊断和鉴别诊断有较大的意义。【关键词】淋巴瘤　基因重排;诊断　　DetectingProblematicProliferativeLesionsofLymphTissuebyIgHandTCRGeneRearrangementTechnique　　Abstract：ObjectiveToinvestigatethesignificanceindiagnosisofproblematicproliferativelesionsoflymphtissuebyIgH,TCRgenerearrangementtechnique.MethodsThirtysixcaseso

3、fproliferativelesionsoflymphtissuemunohistochemistry,enttechniquetofurtherdeterminethediagnosis.20casesofpreviouslydiagnosedlymphomaand10reactivelymphadenitisplesoflymphomaent.29/36(80.6%)casesofproblematiclesionshomunohistochemistryent,4phadenitisand1atypicalproliferation.ConclusionItissigni

4、ficantlyusefultosolvetheproblemsindifferentiatingdiagnosisofelusiveproliferativelesionsoflymphtissue,byIgH,TCRgenerearrangementanalysis.　　Keyphoma;Generearrangement;Diagnosis　　0引言　　本研究应用IgH、TCRβ、TCRγ基因重排技术对36例疑难淋巴组织增生性病变进行分析，以探讨实际工作中解决疑难问题的可能性及意义。　　1材料与方法　　1．1材料　　收集2000年1月～2004年5月解放军总医院及外院临

5、床初诊为淋巴瘤的淋巴组织增生的活检标本36例，经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色常规免疫组化CD20、CD3、CD43、CD79a等仍不能肯定诊断。其中淋巴结为13例，结外病变为23例，男21例、女15例，年龄为14～88岁，中位年龄为48岁。同时取10例淋巴结反应性增生作为阴性对照，20例既往肯定诊断的淋巴瘤为阳性对照。　　1．2方法　　1.2.1DNA提取36例经组织学和免疫组化诊断的福尔马林固定、石蜡包埋的淋巴瘤组织，切取4～6片5μm的淋巴瘤蜡块组织，置于1.5ml小离心管内，用二甲苯脱蜡3次后，无水酒精去二甲苯，在含蛋白酶K的裂解液中55℃消化1h。煮沸灭活蛋白酶

6、K，并离心，取上清2μl直接用于PCR。　　1.2.2PCR引物及扩增FR3IgH[1]:引物I5’CTGTCGACACGGCCGTGTATTACTG3’,引物Ⅱ5’AACTGCAGAGGAGACGGTGACC3’,产物为100120bp。TCRβ[2]：引物I5’TCATGGTGTAACATTGTGGGGAC3’(D2)，引物Ⅱ5’AGCACCGTGAGCCTGGTGCC3’（J2），产物为55～86bp。TCRγ[3]:引物Ⅰ5’TACATCCACTGGTCCTACACCA3’,引物Ⅱ5’CCCGTCGACTACCTTGGAAATGTTGTATTC

7、TTC3’。DNA扩增体系为25μl，10×PCR缓冲液25μl，dNTP2μl，热启动TaqDNA聚合酶1μ，MgCl2浓度1.5mM，模板DNA2μl。95℃5min后，94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环后，72℃延伸7min。　　1.3结果判定　　IgH、TCR基因克隆性重排阳性为一清晰的电泳带,IgH大小为100～120bp、TCRβ为55～86bp、TCRγ为300bp，电泳条带模糊或多条带均判断为阴性。　　2结果　　2．1IgH、T