多西他赛联合放疗对大鼠脊髓损伤的观察

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1、多西他赛联合放疗对大鼠脊髓损伤的观察作者：杨月琴，金伟，邹丽娟，赵瑾瑶，邵淑娟【摘要】目的探讨多西他赛联合放射治疗对大鼠脊髓损伤的影响。方法将40只eV电子线照射大鼠胸段脊髓，照射野为2cm×4cm，5Gy/次，隔日1次，总剂量为40Gy。联合组多西他赛与照射的间隔时间为3d。照射结束后5个月，行活体灌注固定，取材，光镜和电镜观察脊髓的形态学变化。结果光镜下，放疗组和先多西他赛后放疗组白质部分坏死；先放疗后多西他赛组白质大片坏死。后2组均见胶质细胞核固缩。各组灰质内神经元和血管未见变化。电镜下，各组脊髓髓鞘改变程度不一。放疗组脊髓髓鞘板层结构水肿、粘连，模糊不清。先多西他赛后

2、放疗组的脊髓髓鞘的板层结构部分松解、扭曲；胶质细胞核固缩。先放疗后多西他赛组脊髓损伤髓鞘的板层结构大部分松解、扭曲、断裂；细胞器严重变形；胶质细胞凋亡。各组血管均未见明显改变。结论多西他赛与放疗联用明显加重脊髓损伤，且放疗后加用多西他赛脊髓损伤加重。【关键词】脊髓损伤；化学疗法；多西他赛；放射疗法Keyotherapy；Docetaxel；Radiotherapy目前，用于和放疗联合治疗肿瘤的化疗药物很多，其中多西他赛(docetaxel)是抑制各种肿瘤效果较好的化学试剂，临床上单独或与其他化疗药物合用与放疗联合成为多种癌瘤的主要治疗方案[14]；但多西他赛合并脊髓区放疗对

3、脊髓损伤影响的资料较少。本实验通过PUS光学显微镜、KLBⅤ型超薄切片机、JEM3000EX透射电子显微镜。1.2实验动物与分组本实验采用大连医科大学动物实验中心提供的eV电子线照射，单次照射剂量为5Gy，根据脊髓的深度换算出6MeV照射时的机器跳数，剂量率为300cGy/min，固定源皮距（SSD）技术照射，SSD=100cm，隔日1次，共8次，照射总剂量为40Gy。8次照射结束后3天，先放疗后多西他赛组大鼠单次腹腔注射docetaxel5mg/kg。1.4取材于照射结束后5个月，用3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，用4%多聚甲醛加1.25%的戊二醛进行活体

4、灌注，从背部暴露脊髓，小心分离出照射部位脊髓，分成2段，上段切成约1cm3的组织块固定于5%福尔马林溶液中；下段切成约1mm3的组织块固定于2.5%戊二醛中。1.5光镜观察将固定于5%福尔马林溶液中的脊髓组织块，经乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡切片，HE染色，光镜观察。1.6电镜观察将固定于2%戊二醛中的脊髓组织块，经1%俄酸双固定，磷酸缓冲液清洗，乙醇脱水，Epon812包埋液常规浸透、包埋，半薄切片，经甲苯胺蓝染色，光镜下定位，超薄切片，再经铀铅盐双染色，透射电镜下观察。2结果2.1光镜观察各组脊髓形态变化光镜下，空白组的大鼠脊髓白质（图1）和灰质（图2）。多西他赛组白质内

5、部分有髓神经纤维排列紊乱（图３）。放疗组灰质内神经元、胶质细胞、血管未见明显改变（图４），白质出现部分坏死（图５）。先多西他赛后放疗组白质部分坏死（图６）；灰质内神经元、血管未见明显改变，胶质细胞核固缩（图７）。先放疗后多西他赛组白质出现大片坏死（图８），灰质内胶质细胞核固缩，神经元、血管未见明显改变（图９）。2.2电镜观察各组脊髓病理变化空白组正常大鼠脊髓髓鞘为同心圆板层排列，密实有序，线粒体饱满（图10）。多西他赛组部分髓鞘结构出现板层结构松解、扭曲等轻度变化，细胞器相对完好。放疗组髓鞘的板层结构水肿、粘连，模糊不清（图11），血管未见改变（图12）。先多西他赛后放疗组髓

6、鞘的板层结构部分松散(图13)；胶质细胞核固缩（图14）；血管未见改变（图15）。先放疗后多西他赛组脊髓损伤程度严重，表现为正常髓鞘的板层结构大部分松解、扭曲、断裂；细胞器严重变形（图16）；胶质细胞凋亡（图17）；血管未见改变（图18）。3讨论脊髓放射性损伤是放射治疗的晚反应之一。由于它危害大，而且具有不可逆性，越来越引起人们的重视。但是由于脊髓的放射性损伤出现的时间晚，研究周期长，目前资料较少[5]。本实验观察大鼠放射后脊髓损伤改变的结果表明，每次5Gy、隔日1次、总剂量40Gy的分次方案，总剂量虽然低于脊髓的耐受剂量45Gy，仍然导致了比较严重的脊髓损伤，符合脊髓是晚反

7、应组织，对大的分次剂量敏感的特征，即大的分次剂量降低了脊髓的耐受量[6,7]。脊髓放射性损伤主要发生在白质，光镜下表现为部分白质坏死，电镜下表现为髓鞘板层结构水肿、粘连，模糊不清，灰质和血管未见明显改变。放化疗联合实验组结果表明：多西他赛和放疗合用组脊髓损伤比单纯多西他赛组和单纯放疗组脊髓损伤加重，并且先放疗后多西他赛组脊髓损伤比先多西他赛后放疗组重，表现为大片白质坏死；超微结构可见髓鞘板层结构大部分松解、扭曲、断裂；细胞器严重图10空白组大鼠脊髓髓鞘超微结构(标尺200nm)图11放疗组大鼠脊髓髓鞘超