重症肌无力大鼠膈肌运动终板的形态学研究论文

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1、重症肌无力大鼠膈肌运动终板的形态学研究论文刘睿李柱一张琪王桂平刘津平鞠躬【关键词】重症肌无力Researchonmorphologicalchangesofendplatesindiaphragmofexperimentalautoimmunemyastheniagravisrats【Abstract】AIM：Tostudythepathologicalcharacteristicsoftheendplateondiaphragminexperimentalautoimmunemyastheniagravisanimalmodelbylightmi

2、croscopyandelectronmicroscopy.METHODS:PassivelytransferredmyastheniagravisanimalmodelonoclonalantibodymAb35,andtheultrastructureoftheendplatesicaltechnique.RESULTS:Myastheniasymptomsentalgroup.Theendplatesofdiaphragmshoilartothoseofmyastheniagravispatientsbutnochangeberoftheen

3、dplates.Nochangesmayresultinthedyspneainexperimentalautoimmunemyastheniagravis.【Keyyastheniagravis;acetylcholinesterase;receptors,cholinergic;motorendplate;ultrastucture【摘要】目的:探讨重症肌无力大鼠膈肌运动终板的光镜及电镜结构变化.方法:被动转移乙酰胆碱受体单抗mAb35建立SD大鼠获得性自身免疫性重症肌无力模型，用乙酰胆碱酯酶法显示膈肌运动终板，并行超微结构观察.结果:实验组大

4、鼠注射mAb35后出现明显肌无力症状，其膈肌运动终板数量基本不变，但出现与重症肌无力患者相似的超微结构变化，对照组则无明显变化.结论:膈肌出现运动终板超微结构的改变，是重症肌无力被动转移模型大鼠呼吸衰竭的可能原因.【关键词】重症肌无力；乙酰胆碱酯酶；受体，胆碱能；运动神经肌肉终板；超微结构0引言重症肌无力(MG)是运动终板处最常见的疾病.freelAb35杂交瘤细胞株（ATCC公司）；乙酰胆碱碘化物（FLUKA公司）.12方法121重症肌无力被动转移模型的建立参照文献［1］的方法制备乙酰胆碱受体单抗mAb35，将SD大鼠随机分成实验组和对照组各5只

5、，实验组按照文献［2］的方法建立重症肌无力被动转移模型：各只按025mg/kgip含mAb35的Ringers液1mL(140mmol/LNaCl,54mmol/LKCl,1mmol/LCaCl2，24mmol/LNaHCO3,pH74)，对照组各只仅注射Ringers液1mL.122症状评估每6h观察动物毛色、步态、摄食情况，并测量其呼吸频率及肌力.肌力根据国际标准以它们抓握、悬吊和行走的情况予以分级［3］：0级，肌力完全正常；1级，3～5次抓握和悬吊实验后肌力减弱；2级，后肢不完全瘫痪；3级，后肢瘫痪不能站立；4级，垂死状态；5级，死亡.123

6、乙酰胆碱酯酶(AChE)法显示膈肌运动终板42h后各组大鼠经常规多聚甲醛灌注固定，迅速取下膈肌，制备40μm厚连续冰冻切片，按照文献［4］的方法行胆碱酯酶染色，切片置于乙酰胆碱酯酶孵育液1h后蒸馏水洗，以不加底物的孵育液作阴性对照，脱水透明封片.在10倍目镜4倍物镜下每只动物随机选取1个视野统计运动终板数量，以各组5个视野的均值分别代表实验组和对照组运动终板数量，用SPSS软件行t检验作统计学分析.124透射电镜观察运动终板的超微结构大鼠灌注固定后在含25g/L戊二醛的后固定液中固定2h，比照相邻切片上运动终板多的区域取材，按常规电镜脱水、包埋程序

7、制成500nm超薄切片，醋酸双氧铀和枸橼酸铅双重电子染色，以JEM2000EX电镜行透射电镜观察.2结果21动物模型症状观察实验组SD大鼠在注射后8h开始出现活动减少，毛皱，精神差，动作笨拙，行动迟缓，行走困难不稳、对刺激反应迟缓，肌张力低，体质量逐渐下降，注射新斯的明可在短时间内改善症状.24h始症状迅速加重，呼吸频率增快可达140次/min以上.随着肌无力程度的加重，呼吸节律由浅快逐渐发展至深慢呼吸，呼吸困难不断加重，类似重症肌无力患者症状，至36h有约1/3死于呼吸衰竭，对照组则无明显变化.Fig1表示实验组大鼠各时间点症状变化情况（分级标准

8、见前材料与方法），可见随着时间推移实验组肌无力症状进行性加重，对照组肌力完全正常为0级故未标出.图1实验组SD大鼠各时间点