胆盐输出泵在胆道梗阻-再通大鼠肝组织中的表达及意义

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1、胆盐输出泵在胆道梗阻?再通大鼠肝组织中的表达及意义祝建勇别平陈应果冯春林唐春吴乔　【摘要】目的探讨胆盐输出泵(BSEP)在胆道梗阻?再通大鼠肝组织中的表达及意义。方法将54只ias99病理图像分析系统半定量检测BSEP的平均积分光密度(IOD)，与TBA和TNF?α作相关分析。结果CBDL术后大鼠血清ALT，TBA及TNF?α显著增高(P<0.05)；BR术后上述指标逐步好转，7d时仍显著高于Sham组水平(P<0.05)。BSEPmRNA水平随着梗阻时间的延长明显降低(P<0.05)，CBDL术后14d仅微弱表达，梗阻

2、解除后缓慢增高；BR术后7d仍未恢复至Sham组水平。免疫组化染色显示BSEP表达定位于肝细胞膜上，变化规律与前述一致，并且与TBA和TNF?α呈显著负相关(r1=-0.9257，r2=-0.8536，P<0.05)。结论胆道梗阻?再通大鼠模型中胆盐的代谢与BSEP水平密切相关，而TNF?α可能是影响BSEP变化的重要因素。【关键词】胆盐输出泵肿瘤坏死因子?α胆道梗阻再通肝组织大鼠【Abstract】ObjectiveToexploretheroleofbilesaltexportpump(BSEP)inratliveraleean

3、BSEP?IODi?quantitativelybyusingMias99pathologicalimageanalysissystem.MeanTBAandTNF?αed.ResultsAfterCBDL,levelsofserumALT,TBAandTNF?αgroupsevendaysafterbilerefloRNAdecreasedasbileductobstructionelongated(P<0.05),increasedslogroupsevendaysafterBR.Immunohistochemistryresu

4、ltsshoilartendencytoabove?mentionedchange,ie,expressionofBSEPembrane,ayberesponsibleforbilesaltmetabolisminratmodelofbileductobstructionandbilerefloportantroleinregulatingBSEPexpression.【Keyp;Tumornecrosisfactorα;Biliarytractobstruction;Recanalization;Livercells;Rats胆酸(盐)

5、是肝脏分泌到胆汁中最大量的有机酸，是胆汁的主要成分。胆道梗阻时高胆酸(盐)血症一方面会导致氧自由基的产生和脂质过氧化物增加，损害生物膜功能，导致线粒体呼吸链功能障碍和氧化磷酸化紊乱；另一方面会引发肠道细菌移位和内毒素血症，进一步诱导机体免疫抑制、胃肠道黏膜损伤甚至急性肾功能衰竭，从而形成恶性循环［1］。临床上部分重度淤胆患者在胆道梗阻解除后黄疸消退仍缓慢甚至发生严重并发症。胆盐输出泵(bilesaltexportpump，BSEP)是位于肝细胞膜上介导其底物依赖ATP自细胞内转运至毛细胆管的一种膜糖蛋白，而胆酸(盐)是其合适底物［2］。本

6、研究观察BSEP在胆道梗阻及再通大鼠肝组织中的表达变化，探讨其在胆酸(盐)代谢中的作用。1材料与方法1.1动物模型建立［3］健康雄性)组、胆总管结扎(monbileductligation，CBDL)组和胆道再通(bilereflom的硅胶管架桥行胆总管?十二指肠内引流术。Sham组只游离出胆总管，不结扎。1.2标本制备各时相点大鼠均于后腔静脉穿刺取血4～5ml，冰浴，离心15min(4℃，3000r/min)，取上清液置于-70℃保存待测；同时经门静脉灌注生理盐水冲去血液，取肝组织切成约1.0cm×0.5cm×0.5cm大小，分别置入4

7、%多聚甲醛中待病理切片和液氮中待总RNA提取。1.3检测指标及方法(1)血清学指标的检测：丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)以及肿瘤坏死因子(TNF?α)分别按照试剂盒说明在紫外分光光度计和自动γ计数器上测定。(2)逆转录PCR检测BSEPmRNA水平：①采用Tripure试剂一步法提取肝组织匀浆总RNA，1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定，紫外分光光度计测定纯度并定量；②逆转录扩增按RT?PCR试剂盒(美国Promega生物技术有限公司生产)说明书在GeneAmp2700PCR仪(美国PerkinElmer有限责任公司生产)中进

8、行，自行设计BSEP引物序列：上游为5'?CAACGCATTGCTATTGCTCG?3'，下游为5'?GTTCTGGATGGTGGACAAACG?3'，内参照β?actin引物序列：上游为5'