bcl2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞ncih69放射敏感性的影响论文

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1、bcl2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞NCIH69放射敏感性的影响论文【摘要】目的研究bcl2反义寡核苷酸对人小细胞肺癌细胞NCIH69放射敏感性的影响。方法将NCIH69细胞培养传代,然后将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同寡核苷酸导入细胞中,用TT法测定细胞存活分数。结果ethodsCulturedNCIH69cellsine.ExpressionofBcl2inedbyI1640中培养.freelineReagent购于InvitrogenLifeTechnologies公司。细胞分4组：空白对照组，仅转染脂质体；正义寡核苷

2、酸组，脂质体介导转染正义寡核苷酸；无义寡核苷酸组，脂质体介导转染无义寡核苷酸；反义寡核苷酸组，脂质体介导转染反义寡核苷酸。置于6孔板上培养，每孔细胞浓度2×108/L，24h后清除细胞培养基，无血清培养基OptiMEM清洗2次，每孔重新加入OptiMEM800μL，轻轻混匀。取出20μmol/L的寡核苷酸10μL、脂质体5μL分别稀释于175、10μL的OptiMEM无血清培养基中，将稀释后的寡核苷酸和脂质体混匀，室温下孵育20min。每孔加入200μL寡核苷酸脂质体混合物，置于孵箱内孵育4h。最后，换用体积分数0.20胎牛血清的RPMI1640培养液继续培养72h。1.4V加速器X

3、线，源皮距90cm）0、2、4、6、8、10Gy,照射后置于孵箱中，48h后测定细胞凋亡率。1.6细胞凋亡率的检测收集照射后48h的4组细胞，调整细胞数为5×108/mL，以1000r/min离心5min，弃上清，冷PBS洗2次，加入50mg/LPI低渗液（含NP40、RNA酶）200μL，混匀,4℃避光染色30min，400目筛网过滤。FACS管上样检测DNA含量，激发波长488nm，CV值2％，FSC/SSC设门。收集门内10000个细胞，用CELLQuest软件分析细胞凋亡率。1.7MTT测定存活分数收集照射后的4组细胞，调整细胞数为5×107/L。取96孔板，每孔加入200μL稀释

4、好的细胞，每组设4个复孔，孵箱中培养72h。每孔加入5mg/L的MTT各10μL，继续培养4h，离心去上清，每孔加入200μL二甲基亚砜，混匀，用酶标仪检测492nm波长处的吸光度值，计算存活分数（SF）。SF=实验组的平均吸光值/空白对照组的平均吸光值×100%。每组重复试验3次，取平均值。1.8统计学处理实验数据以±s表示，用SPSS11.5软件对结果进行单因素方差分析。2结果2.1Bcl2蛋白表达结果VOUKAC,etal.Immunohistochemicaldetectionofbcl2,p53,MDM2andp21EYNRE,STEPHENSLC,ANGKK,etal.Het

5、erogeneityinthedevelopmentofapoptosisinirradiatedmurinetumorsofdifferenthistologiesJ.IntJRadiatBiolPhys,1993,64:583589.5KORSMEYERST.Bcl2initiatesaneallcelllungcancercellbyanantisenseoligodeoxynuleotidetargetingthebcl2codingsequenceJ.JNatilCancerInstitute,1997,89(14):10271036.7PILLAIMR,JAYAPRAK

6、ASHPG,NAIRMK.bcl2immunoreactivitybutnotp53accumulationassociatedorresponsetoradiotherapyincervicalcarcinomaJ.JCancerResClinOncol,1999,125(1):5560.8SIRZENF,ZHIVOTOVSKYB,NILSSONA,etal.Spontaneousandradiationinducedapoptosisinlungcarcinomacellsantumors,YAMAKA,etal.Radiosensitivityandradiationinduce

7、dapoptosis:relationshiptop53,p21(WAF1)andBbJ.JEuroRadiatOncol,1997,(Suppl2):8185.