bcl2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞ncih

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1、bcl2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞NCIH【摘要】目的研究bcl2反义寡核苷酸对人小细胞肺癌细胞NCIH69放射敏感性的影响。方法将NCIH69细胞培养传代,然后将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同寡核苷酸导入细胞中,用TT法测定细胞存活分数。结果ethodsCulturedNCIH69cellsine.ExpressionofBcl2inedbyI1640中培养，于37℃体积分数0.05的CO2温箱中孵育。　　1.2bcl2寡核苷酸序列收集转染72h后的4组细胞，即正义、反义、无义寡核苷酸组和空白组，分别转移

2、至6孔板中，调整细胞数为2×109/L，板上加1cm厚组织补偿,室温下X线照射（6MV加速器X线，源皮距90cm）0、2、4、6、8、10Gy,照射后置于孵箱中，48h后测定细胞凋亡率。　　1.6细胞凋亡率的检测收集照射后48h的4组细胞，调整细胞数为5×108/mL，以1000r/min离心5min，弃上清，冷PBS洗2次，加入50mg/LPI低渗液（含NP40、RNA酶）200μL，混匀,4℃避光染色30min，400目筛网过滤。FACS管上样检测DNA含量，激发波长488nm，CV值<2％，FSC/SSC设门。收集门内10000个细胞，用CELLQuest软件分

3、析细胞凋亡率。　　1.7MTT测定存活分数收集照射后的4组细胞，调整细胞数为5×107/L。取96孔板，每孔加入200μL稀释好的细胞，每组设4个复孔，孵箱中培养72h。每孔加入5mg/L的MTT各10μL，继续培养4h，离心去上清，每孔加入200μL二甲基亚砜，混匀，用酶标仪检测492nm波长处的吸光度值，计算存活分数（SF）。SF=实验组的平均吸光值/空白对照组的平均吸光值×100%。每组重复试验3次，取平均值。　　1.8统计学处理实验数据以±s表示，用SPSS11.5软件对结果进行单因素方差分析。　　2结果　　2.1Bcl2蛋白表达结果VOUKAC,etal.Immun

4、ohistochemicaldetectionofbcl2,p53,MDM2andp21EYNRE,STEPHENSLC,ANGKK,etal.Heterogeneityinthedevelopmentofapoptosisinirradiatedmurinetumorsofdifferenthistologies[J].IntJRadiatBiolPhys,1993,64:583589.　　[5]KORSMEYERST.Bcl2initiatesaneallcelllungcancercellbyanantisenseoligodeoxynuleotidetarget

5、ingthebcl2codingsequence[J].JNatilCancerInstitute,1997,89(14):10271036.　　[7]PILLAIMR,JAYAPRAKASHPG,NAIRMK.bcl2immunoreactivitybutnotp53accumulationassociatedorresponsetoradiotherapyincervicalcarcinoma[J].JCancerResClinOncol,1999,125(1):5560.　　[8]SIRZENF,ZHIVOTOVSKYB,NILSSONA,etal.Spontan

6、eousandradiationinducedapoptosisinlungcarcinomacellsantumors,YAMAKA,etal.Radiosensitivityandradiationinducedapoptosis:relationshiptop53,p21(WAF1)andBb[J].JEuroRadiatOncol,1997,(Suppl2):8185.