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1、bcl2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞NCIH【摘要】目的研究bcl2反义寡核苷酸对人小细胞肺癌细胞NCIH69放射敏感性的影响。方法将NCIH69细胞培养传代,然后将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同寡核苷酸导入细胞中,用TT法测定细胞存活分数。结果ethodsCulturedNCIH69cellsine.ExpressionofBcl2inedbyI1640中培养,于37℃体积分数0.05的CO2温箱中孵育。 1.2bcl2寡核苷酸序列收集转染72h后的4组细胞,即正义、反义、无义寡核苷酸组和空白组,分别转移
2、至6孔板中,调整细胞数为2×109/L,板上加1cm厚组织补偿,室温下X线照射(6MV加速器X线,源皮距90cm)0、2、4、6、8、10Gy,照射后置于孵箱中,48h后测定细胞凋亡率。 1.6细胞凋亡率的检测收集照射后48h的4组细胞,调整细胞数为5×108/mL,以1000r/min离心5min,弃上清,冷PBS洗2次,加入50mg/LPI低渗液(含NP40、RNA酶)200μL,混匀,4℃避光染色30min,400目筛网过滤。FACS管上样检测DNA含量,激发波长488nm,CV值<2%,FSC/SSC设门。收集门内10000个细胞,用CELLQuest软件分
3、析细胞凋亡率。 1.7MTT测定存活分数收集照射后的4组细胞,调整细胞数为5×107/L。取96孔板,每孔加入200μL稀释好的细胞,每组设4个复孔,孵箱中培养72h。每孔加入5mg/L的MTT各10μL,继续培养4h,离心去上清,每孔加入200μL二甲基亚砜,混匀,用酶标仪检测492nm波长处的吸光度值,计算存活分数(SF)。SF=实验组的平均吸光值/空白对照组的平均吸光值×100%。每组重复试验3次,取平均值。 1.8统计学处理实验数据以±s表示,用SPSS11.5软件对结果进行单因素方差分析。 2结果 2.1Bcl2蛋白表达结果VOUKAC,etal.Immun
4、ohistochemicaldetectionofbcl2,p53,MDM2andp21EYNRE,STEPHENSLC,ANGKK,etal.Heterogeneityinthedevelopmentofapoptosisinirradiatedmurinetumorsofdifferenthistologies[J].IntJRadiatBiolPhys,1993,64:583589. [5]KORSMEYERST.Bcl2initiatesaneallcelllungcancercellbyanantisenseoligodeoxynuleotidetarget
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