黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠靶组织葡萄糖转运子4的

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1、黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠靶组织葡萄糖转运子4的【关键词】2型糖尿病;葡萄糖转运蛋白;胰岛素;空腹血糖　　黄连解毒汤（HuanglianJieduDecoction,HLJDD）出自唐代名医王焘之《外台秘要》，是清热解毒的代表方，由黄连、黄芩、黄柏和栀子组成，传统上临床主要用于治疗相当于热毒证的感染性疾病。而最近世界权威杂志相继报道黄连解毒汤中栀子提取物京尼平［1］和黄连提取物黄连素［2］均能有效治疗糖尿病。本研究所的前期研究也证明，黄连解毒汤具有降血糖，调血脂的功效［3~5］，为了进一步深入探讨其治疗2型糖尿病的机制，本实验观察了黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠脂肪和肌肉组织胰岛素信号

2、转导通路中葡萄糖转运蛋白4（glucosetransporter4,GLUT4）表达及转位的影响，旨在探讨该方改善胰岛素抵抗和防治2型糖尿病的作用机制。　　1材料与方法　　1.1实验动物及饲料雄性健康arker，FermentasLifeScience公司产品；单克隆GLUT4抗体，RD公司产品；βactin单克隆抗体，LabVision公司产品；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG，北京中杉金桥生物技术有限公司产品；增强化学发光法（enhancedchemiluminescence,ECL）试剂盒，Pierce公司产品。　　1.3动物分组及处理动物先适应性喂养2周，随机分为正常对

3、照组和造模组，造模组经尾静脉注射STZ（30mg/kg）后，用基础饲料喂养2周，然后作口服葡萄糖耐量试验（oralglucosetolerancetest,OGTT)，筛选糖耐量异常者随机分组。HLJDD组：按剂量10ml/kg体质量给大鼠灌服上述黄连解毒汤混悬液，每日8：30～9：30灌胃1次（以下各组灌胃药液容积及灌胃时间与此同）；ASP组：灌上述阿司匹林混悬液；模型组：灌上述含0.5％羧甲基纤维素的PBS溶液。以上3组在治疗期间喂以高脂高热量饲料；正常对照组不予任何干预。均喂养10周，末次给药后禁食12h作OGTT，配制40％葡萄糖水按2.2g/kg剂量灌胃，用剪尾的方法在灌

4、胃前及灌胃后30、60和120min从尾静脉采血，检测空腹血糖值（fastingbloodglucose,FBG）及血清胰岛素（fastingseruminsulin,FINS）的含量。OGTT结束后，继续喂养1周，禁食12h后用50mg/kg戊巴比妥腹腔注射麻醉，取一侧附睾旁脂肪和后肢骨骼肌，然后从门静脉推注胰岛素（8U/kg），注射后4min取另一侧附睾旁脂肪组织和后肢肌肉组织［8］，迅速冻存于液氮中，24h后置于－80℃冰箱以待测GLUT4的蛋白表达量。　　1.4生化指标的检测血糖用葡萄糖氧化酶法检测，空腹血清胰岛素用放免法检测，均参照说明书进行。　　1.5GLUT4的蛋白表

5、达的检测参考Klip的方法［9］提取膜蛋白。用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度后取各组样品25μg蛋白质，以12％的SDSPAGE胶分离蛋白。然后采用湿转法（200mA,3h）［10］将蛋白质转移至硝酸纤维素膜上。再用含5%脱脂奶粉的TBST（含0.1％Talcontrolgroup;△P＜0.05,vsuntreatedgroup;▲P＜0.05,vsaspirintreatedgroup.　　表2各组大鼠脂肪和肌肉组织GLUT4蛋白表达（略）　　Table2GLUT4proteinexpressionofadiposetissueandskeletalmuscleinfourgro

6、ups　　*P＜0.05,vsuntreatedgroup;△P＜0.05,vsaspirintreatedgroup.　　图1各组脂肪组织GLUT4蛋白表达（略）　　Figure1GLUT4proteinexpressionofadiposetissueinfourgroups　　图2各组骨骼肌组织GLUT4蛋白表达（略）　　Figure2GLUT4proteinexpressionofskeletalmuscleinfourgroups　　3讨论　　2型糖尿病的发病机制目前尚未完全弄清，但大量的证据表明，胰岛素抵抗是2型糖尿病的重要发病机制之一。胰岛素信号转导通路中任何一个因

7、子或步骤受损都可能引起胰岛素抵抗。因此，改善胰岛素信号转导，提高胰岛素敏感性是治疗2型糖尿病的一个重要目标。在胰岛素信号转导通路中，GLUT4是多条途径的终点。它作为胰岛素作用下的主要葡萄糖运载体，在基础状态下位于细胞膜内，当胰岛素刺激或运动时，可以通过转运先前存在的GLUT4到细胞膜表面来介导外周胰岛素敏感组织（肌肉、脂肪等组织）对葡萄糖的转运和摄取［11］，因此，GLUT4表达减少、转位效率和活性降低都可导致胰岛素抵抗形成。改善以上环节可能是防治2型糖尿病的有效途