砂生槐种子水提物对荷瘤小鼠免疫功能的影响论文

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1、砂生槐种子水提物对荷瘤小鼠免疫功能的影响论文郭君，马兴铭，安方玉，田卫花【摘要】目的研究砂生槐种子水提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法以S180荷瘤小鼠为研究对象，砂生槐种子水提取物不同剂量连续灌胃给药10d，分别测定其抑瘤率、胸脾指数、自然杀伤细胞、白细胞介素-2（IU-2）水平。结果砂生槐种子水提取物在1200mg/kg，2400mg/kg剂量组时，其抑瘤率分别为34.9%.freelSophoramoorcroftiana(SMSethodsS180-bearingmiceor,indexesofthymusandspleen,acti

2、vityofNKandthelevelofIL－2g/kgSMS）泛指豆科槐属，又名西藏“狼牙刺”“刺紫”。据报道，砂生槐具有抑菌、抗病毒、抗心律失常、调节免疫等多种药理学作用［1］。以往对其营养成分的分析［2，3］的报道较为多见，马兴铭等［4］体外实验结果显示，砂生槐种子生物碱能诱导SCG-7901细胞凋亡的作用，但对砂生槐种子水提取物（SI-1640培养基由美国Invitrogen公司提供；小牛血清购自杭州四季青生物有限公司；白细胞介素-2（IL-2）放射免疫检测试剂盒购自华美生物工程公司；环磷酰胺（CTX）购自江苏恒瑞医药股份有限公司（批

3、号06050821）；分析纯二甲亚砜（DMSO）为金山化工厂产品。2方法2.1肿瘤模型的建立将接种肿瘤细胞后7d生长良好的小鼠，颈椎脱臼处死，置75%的酒精中浸泡10min，置超净工作台，从腹腔抽出的乳白色腹水，用无菌生理盐水按1∶4比例配制成癌细胞悬液（2×106/ml）。将该肿瘤细胞悬液对实验小鼠进行造模，每只小鼠右腋窝皮下接种0.2ml。以上均在无菌环境中操作。2.2分组及给药设6组，每组10只，雌雄各半。设一组为不接种瘤株的生理盐水正常对照组；余50只小鼠每只右腋皮下接种0.2ml癌细胞悬液，24h后随机分为5组，即荷瘤对照组，环磷酰胺

4、对照组及砂生槐种子水提物600，1200，2400mg/kg3个剂量组。正常对照组和荷瘤空白对照组用生理盐水灌胃，环磷酰胺对照组腹腔注射环磷酰胺20mg/（kg·d），连续给药5d，砂生槐种子提物3个剂量组于接种第2天开始灌胃给药，1次/d，连续10d，第11天处死小鼠。2.3测肿瘤抑制率停药后第2天处死小鼠，剥离完整肿瘤组织，电子天平称量瘤体湿重（精确到0.01g）并计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率（%）=荷瘤对照组平均瘤重-给药组平均瘤重荷瘤对照组平均瘤重×100%肿瘤组动物平均质量小于1表示肿瘤生长不良，实验组小鼠死亡率超过20%表示药物所致毒

5、性。2.4观察对小鼠免疫器官的影响。灌胃给药结束后次日解剖小鼠取出胸腺，脾脏，计算脏器重量、脏器指数。脏器指数=免疫器官质量/体质量×10002.5荷瘤小鼠NK细胞杀伤靶活性的测定常规制备脾脏细胞，制成浓度为5×106个/ml的细胞悬液。与96孔板每孔中分别加入100μl脾细胞悬液和（YAC-1细胞，靶细胞（YAC-1细胞，浓度为1×106个／ml,效靶比值为50：1），设靶细胞自然释放组和最大释放对照组（YAC-1细胞100μl+1%NP-40100μl）。每样本设3个重复孔，培养16h后，吸出各孔上清100μl加入另一细胞培养板中，置37℃

6、10min,每孔加入新鲜配置的低物液100μl，室温、避光反应10～15min,再加入1.0mol/L柠檬酸终止液30μl，酶标分析仪570nm波长处测定A值，按以下公式计算NK细胞杀伤靶活性。NK细胞活性（%）＝（实验组A-自然释放组A）/（最大释放组A-自然释放组A）×100%。2.6细胞因子测定采用小鼠白细胞介素-2放免试剂盒，严格按照说明书操作。2.7统计学方法用SPSS10.0统计软件分析。检测结果采用±s表示，各组间均数比较采用单因素方差分析，实验组与对照组间均数比较用独立样本t检验。3结果3.1抑瘤率实验显示，砂生槐种子水提取物1

7、200mg/kg，2400mg/kg剂量组对S180小鼠的生长具有一定抑制作用，抑瘤率分别为34.9%，41.4%。与荷瘤对照组比较有显著性差异(P0.01)。结果见表1。表1SMSSSSSSSS］.上海：上海科技出版社，1999：204.［2］李玉祥.西藏砂生槐种子的生物学特性及综合利用［J］.自然资源学报,1993，8（5）：75.［3］许毓英,王涛,.freeleraseinhibitors［J］.AntiancerRes，2000,20(6B)：4419.［7］GravesDT,cochranD.Thecontributionofint

8、erleukin-1andtumornecrosisfactortoperiodontaltissuedestruction［J］.Jperiodon