隐丹参酮对淋巴细胞增殖反应的影响论文

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1、隐丹参酮对淋巴细胞增殖反应的影响论文张雷，郑芙林，李珊珊，贾晓益，魏伟【摘要】目的了解隐丹参酮对正常SD大鼠和胶原性关节炎大鼠细胞免疫功能的影响。方法采用鸡II型胶原诱导大鼠胶原性关节炎模型，采用MTT法检测LPS诱导的脾脏B淋巴细胞、ConA刺激的胸腺T淋巴细胞增殖反应。结果隐丹参酮体外用药，低浓度时对正常SD大鼠的淋巴细胞增殖反应具有促进作用，随着浓度的升高开始出现抑制作用；隐丹参酮低浓度时对胶原性关节炎大鼠ConA诱导的胸腺细胞低下的免疫功能具有增强作用.freelg，上海生物制品所生产；鸡II型胶原(CII)，上海本草生物医学研究所产品；DMEM培养粉，美国Gib

2、co公司产品；刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)：美国Sigma公司产品；二甲亚砜（DMSO，分析纯），天津市光复精细化工研究所产品；溴化3（4，5二甲基噻唑2）2，5二甲苯基四氮唑（四甲基偶氮唑蓝，MTT），美国Sigma公司产品。1.3仪器Napco6100型CO2培养箱（美国杜邦公司产品）；GL20A全自动高速冷冻离心机（湖南仪器仪表总厂离心机厂）；EL301stripreader（美国BioTeK公司）。2方法2.1药物的配制CT先用无水乙醇溶解，再用无血清的DMEM培养液配制

3、所需的5个浓度。刀豆素A（ConA），脂多糖（LPS）分别用无血清的DMEM培养液配制。2.2大鼠CIA模型的建立［1］将CⅡ溶于0.1mol·L1醋酸中，在4℃下搅拌使之充分溶解，质量浓度为2g·L-1，置4℃冰箱过夜，再将灭活的卡介苗置于液体石蜡中，配成0.5g·L-1的完全弗氏佐剂，将二者等体积混合、乳化，制成CⅡ乳剂。将该乳剂于大鼠的右后足趾皮内注射0.1ml致炎，第7天尾根部近1/3处和背部3～5点皮内注射该乳剂0.1ml作为激发注射。2.3胸腺T淋巴细胞，脾脏B淋巴细胞增殖功能测定（MTT法）［2］分别取正常大鼠和致炎后35dCIA大鼠，无菌取胸腺和脾制成淋

4、巴细胞悬液，调整细胞至终浓度为1×107/ml，DMEM培养液培养细胞，在96孔培养板上每孔加入100μl细胞悬液，50μlConA（终浓度5μg/ml）或LPS（终浓度6μg/ml），50μl不同浓度的CT（0.1，1，10，100，1000μg/ml）培养48h，终止培养前4h加入20μlMTT(5mg/ml)，继续培养4h后加入150μlDMSO终止反应，酶标仪检测（490nm）吸光度(absorbance，A)值，结果以3个复孔A值的均值表示。2.4统计学处理实验结果以±s表示，组间差异性比较采用SPSS10.0统计软件计算。3结果3.1CT对正常大鼠脾细胞和胸腺

5、细胞增殖影响由表1可知，LPS诱导的脾脏B淋巴细胞和ConA刺激的胸腺T淋巴细胞增殖较正常对照显著增强，差别有显著意义（P0.01）；而CT不同浓度对其增殖表现出不同的效应，低浓度时进一步促进其增殖，1μg/ml时对B、T淋巴细胞增殖反应的促进作用均有统计学意义（P0.05）。随着浓度的增高，出现抑制作用，100，1000μg/ml剂量组对LPS诱导的B淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，1000μg/ml剂量组对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，分别与刺激剂诱导的正常组比较，差异有显著意义（P0.01）。表1CT体外对正常大鼠ConA诱导的胸腺细胞和LPS诱导的脾

6、细胞增殖反应的影响（略）3.2CT对CIA大鼠脾细胞和胸腺细胞增殖反应的改善作用由表2中可知，在CIA大鼠中LPS诱导的脾脏B淋巴细胞增殖反应较正常对照显著增强；ConA诱导的胸腺T淋巴细胞增殖反应却较正常对照组明显降低，差别均有显著意义（P0.01）；而CT不同浓度对其增殖表现出不同的效应，0.1μg/ml时对CIA大鼠低下的胸腺T淋巴细胞增殖具有明显的改善作用（P0.05），而高浓度时（100，1000μg/ml）对LPS诱导的B淋巴细胞增殖有明显的抑制作用（P0.01）。表2CT体外对CIA大鼠ConA诱导的胸腺细胞和LPS诱导的脾细胞增殖反应的影响（略）4讨论类风

7、湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种慢性、系统性自身免疫病。RA以关节滑膜炎为主要特征，表现在多种炎性因子的刺激下，关节滑膜细胞类肿瘤样无限增生，对关节软骨、骨造成进行性破坏，最终导致关节畸形和功能障碍。到目前为止，RA的致病原因和发病机制尚不清楚。近年的研究发现RA的免疫应答是一个免疫调节网络,.freell）对CIA大鼠ConA诱导的胸腺细胞低下的免疫功能具有增强作用，高浓度时（100，1000μg/ml）对LPS诱导的脾细胞亢进的免疫功能具有抑制作用。提示CT可能通过改善CIA大鼠异常的免疫功能