桃红四物汤对雄性sd大鼠脑缺血再灌注损伤海马ca1区神经元的作用研究

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1、桃红四物汤对雄性SD大鼠脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元的作用研究孙玉凤罗亚非*范瑞娟贵阳中医学院基础医学院，贵州贵阳550002基金项目：贵州省科技厅联合基金项目（黔科合中药字［2011］LKZ7034号）。简介：孙玉凤（1986-），女，贵阳中医学院2012级中西医结合基础理论专业研究生。通信：罗亚非（1965-），男，教授，主要从事中药对脑血管疾病形态学影响的研究。E-mail：[email protected]【摘要】目的：探讨桃红四物汤对雄性SD大鼠脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元的作用。方法：采用改良后的新式线栓法建模，随机分为大脑中动脉阻塞再灌注组、正常组

2、、桃红四物汤低、中、高剂量治疗组，每组各20只。治疗组连续7d灌胃治疗，每日两次，早、晚各一次；模型组和正常组正常喂养。自第8天，对各实验组大鼠进行神经功能评分并处死取脑，用Nissl染色法观察海马CA1区神经元的形态和数量。结果：与模型组比较，桃红四物汤治疗组的神经功能评分明显增加(P＜0.01)；Nissl染色治疗组显示海马CA1区神经元数量明显增加，随给药剂量增加而增加(P＜0.01)。结论：脑缺血再灌注后，给予桃红四物汤能显著改善损伤大鼠的大脑神经功能，增加海马CA1区神经元数量，并且其治疗效果随桃红四物汤给药剂量的增加而增强。.jyqkl蒸馏水（于60℃水浴锅中加热充分溶解

3、冷却后，4℃保存）；Nissl染色液，焦油坚牢紫1g，蒸馏水100ml；0.1％TritonX-100通透液配制方法：0.1g柠檬酸钠，100ml蒸馏水；0.1TritonX-100（pH7.0），蒸馏水加至1000ml，37℃水浴中3h，充分溶解混匀；其他如中性树胶、酒精、二甲苯等均为市售国产分析纯。1.4仪器手术显微镜（日本Sanyo公司）；大鼠脑切片模具（上海玉研科学仪器有限公司）；BS-110S电子天平（北京德赛公司）；KH-BM型石蜡自动包埋机（浙江科迪有限公司）；病理切片机（德国LEICA公司）；MLTRAGEMK2型超纯水系统（英国ELGA公司）；电热恒温干燥箱（上海博

4、迅公司）；光学显微镜（日本Sanyo公司）。2方法与结果2.1实验方法2.1.1实验动物分组及给药方法将100只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组（大脑中动脉阻塞再灌注组）、桃红四物汤低（0.7g/kg）、中（1.4g/kg）、高（2.1g/kg）剂量组共5组，每组各20只。桃红四物汤低、中、高剂量组分别以桃红四物汤低、中、高剂量灌胃，每日早晚各一次。模型组不进行任何治疗，正常组正常饲养。至第8天时，将各组大鼠处死并取脑，取下的脑组织用于制作病理切片。2.1.2大鼠线栓法局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO）制作实验前对大鼠适应性喂养一周，自由饮水进食。术前12h禁食，自由饮水。3％水合

5、氯醛1ml/100g腹腔注射麻醉大鼠，取仰卧位，将大鼠四肢固定，颈前区备皮，常规消毒。颈正中线切口3～4cm，钝性分离两侧甲状腺，暴露右侧的胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌之间的三角区域；沿胸锁乳突肌内侧分离肌肉筋膜，暴露颈总动脉（CCA）、颈内动脉（ICA）；在CCA的近心端和远心端分别穿线备用，两线相隔约1～2cm左右；近心端系紧，约距此节1cm处的远心端为松节备用；在CCA近分叉处以微动脉夹暂时夹闭；在CCA的两线间，距CCA分叉处5mm左右，剪一斜行45°小口；待直径约0.23mm的栓线插入CCA后，取下微动脉夹；将栓线沿CCA插入ICA，最后送入大脑中动脉（MCA），在标记接近CCA

6、分叉处或着遇阻力感时停止（插入距离一般为(18.5±0.5)mm的深度），在缺血90min后缓慢抽出栓线，将CCA上远心端的松结系紧，并缝合。2.1.3神经功能评分参照GarciaJH神经功能评分标准［6］，于术后24h、第8天对实验大鼠评分并记录，以评价大鼠的神经行为学。包括以下6项：自主运动、四肢运动的对称性、前爪的伸展性、攀爬运动、肢体的本体感觉、触须反应。2.1.4Nissl染色对制作好的石蜡切片，二甲苯脱蜡10min，放入100％乙醇洗5min，90％乙醇5min，70％乙醇5min，蒸馏水2min。处理好的样品放入尼氏染色液中染色10min，蒸馏水洗2次，90％乙醇洗5s

7、，70％乙醇洗5s，经95％乙醇脱水2min后，再换新鲜95％乙醇脱水2min，二甲苯透明5min，换用新二甲苯再透明5min，最后，以中性树胶封片。2.1.5图像分析使用光学显微镜在400倍镜下随机选取5个视野，记录5个视野中正常神经元的总和，观测各组大鼠海马CA1区神经元形态和数量。Nissl染色以细胞浆和细胞核呈深蓝色，细胞形态完整者为正常神经细胞。2.1.6统计学处理采用SPSS20.0进行数据处理，连续变量用（x±s）表示，检验方法为单因素方差分