论述巨细胞病毒性感染的实验室诊断和防治的进展

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1、论述巨细胞病毒性感染的实验室诊断和防治的进展-->论述巨细胞病毒性感染的实验室诊断和防治的进展摘要：在我国儿童巨细胞病毒(CMV)感染率很高,新生儿脐血或外周血CMV-IgM阳性率为3.1%~13.44%,婴幼儿和儿童则高达87.3%[1]。可见CMV感染是危害小儿健康的一个重要因素。CMV感染即便有症状,也无特征性,要确诊CMV感染,主要依靠实验室检查[2]。笔者就巨细胞病毒性感染的实验室诊断和防治的进展作一综述。关键词:巨细胞病毒感染/诊断巨细胞病毒感染/治疗儿童1　实验室诊断1.1　病毒分离或

2、巨细胞包涵体的检测　传统的方法是从血、尿、唾液、腹水、脐血、乳汁、胎盘等受检标本中培养分离出CMV,如果结果为阳性,那就确诊无疑,但该方法阳性率和敏感度很低,所需时间长达1个月以上,目前已少用。现在多用病毒负荷定量法或微量培养法。前者是将患者定量的白细胞接种到载玻片上的培养细胞,然后检测其中含病毒包涵体的细胞数,阳性细胞的比率越高,说明病毒负荷越大。后者是将患者受检标本接种于载玻片上的成纤维细胞,12h后用抗早期抗原p72的单克隆抗体与病毒抗原结合,用荧光免疫法显示结果。国内方峰等[3]采用含细胞飞

3、片培养板离心吸附AD169株,设时间梯度培养后用链霉亲和素—生物素—酶复合物(SABC)法检测培养物中CMV即刻早期抗原(IEA),此改良提高了常规培养技术的敏感度、特异性,24h内即得出检验结果[4]。1.2　血清特异性抗体检查　利用酶联免疫吸附(ELISA)或其改良技术检测患者血清中抗CMV-IgG和抗CMV-IgM[5]。其结果判断如下:①抗CMV-IgG阳性,表明有CMV感染,但6个月内的婴儿需除外胎传抗体;如从阴性转为阳性则表明原发感染;双份血清抗体滴度≥4倍增高表明活动性感染;严重免疫缺

4、陷者可出现假阴性;②抗CMV-IgM阳性表明CMV活动性感染,如同时抗CMV-IgG为阴性,则表明为原发性感染;新生儿和小婴儿IgM的产生能力较弱,检测结果可为假阴性;如受患儿体内高水平IgG和类风湿因子等因素的干扰,检验结果可出现假阳性。由于母传抗体的存在、免疫抑制剂的使用和先天免疫缺陷等因素对抗体的检测发生干扰,出现假阳性、假阴性的可能性不便排除。抗原的检测则可避免这些因素的影响,敏感性和特异性更高,应用越来越广泛。1.3　抗原血症的检测　抗原的检测主要是应用单克隆抗体与特异性抗原结合的原理,借

5、免疫组化手段检测出受检材料中的病毒抗原,目前主要是针对即刻早期抗原(IEA)、早期抗原(EA)、和晚期抗原pp65抗原进行检测。pp65是一种磷酸蛋白,占病毒蛋白的15%,活动性感染主要在中性粒细胞、单核细胞、血管内皮细胞中表达,是目前最受关注的病毒抗原。当阳性细胞数量达到一定数值,表明感染属活动性,是早期诊断活动性感染较可靠的指标。而且阳性细胞数越多,说明病毒负荷越大,因此,可作为半定量分析[6]。1.4　CMV-mRNA的检测　潜伏性感染,病毒复制水平很低,仅有少量细胞转录CMV-mRNA。而当

6、感染处于活动期,病毒复制明显增多。病毒的复制都要经过mRNA→DNA→蛋白质的过程,如能在mRNA水平进行检测,其灵敏度和特异性较上述方法更高[7]。检测CMV-mRNA的主要手段有原位杂交、聚合酶链反应(PCR)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)。原位杂交是将已知碱基排列顺序的CMV某个特异性DNA或RNA片断作为探针,并加以标记,然后与受检标本中待测的CMV核酸按碱基配对原则进行特异性结合,再应用与标记物相应的检测系统对待测核酸在原有的位置进行细胞内定位、定量。PCR是在引物存在和适宜的反应

7、条件中,使CMV的DNA发生解链、退火、延伸的多次循环,从而扩增所要检测的CMV-DNA片断,通过电泳等形式显示检验结果。而RT-PCR则是先进行逆转录(CMV的mRNA→DNA),然后在经PCR,这种方法更便于定量[8]。据PatelR等[9]报道,检测出CMV-mR-NA阳性者,对于预测活动性CMV感染的可靠性为30%~60%,而阴性者,无一例发生活动性感染,其预测率为100%。2　防治2.1　预防　小儿CMV感染的防治应始于妊娠期。然而,目前尚缺乏有效、安全、无或少副作用的疫苗和药物。Tg/k

8、g,静脉滴注,每12h1次,滴注时间≥1h,连用14d;②维持治疗期5mg/kg,静脉滴注,每天1次,滴注时间≥1h,维持2~3个月;也可以10mg/kg,静脉滴注,每天1次,滴注时间≥1h,每周3d,维持2~3个月。一般情况下,GCV的不良反应包括外周血白细胞、血小板减少,肝功能损害,恶心呕吐、头痛、皮疹以及注射部位肿痛等[12]。孙文英等[13]对GCV的有效性和不良反应进行临床观察,其结果显示,更昔洛韦治疗巨细胞病毒感染是有效的,其不良反应主要是神经毒性,所观察