高场强电磁脉冲对jurkat细胞ifnγ和il4蛋白表达的定量分析

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1、高场强电磁脉冲对Jurkat细胞IFNγ和IL4蛋白表达的定量分析作者：金华王德文唐晓敏郑引焕彭瑞云【摘要】目的研究电磁脉冲（EMP）辐照对白血病肿瘤细胞株Jurkat细胞分泌细胞因子IFNγ和IL4的影响，探讨EMP对Jurkat细胞损伤机制。方法Jurkat细胞经EMP辐照后即刻、1h、6h、12h、24h、48h、72h共7个时相点，细胞悬液甩片,4%多聚甲醛4℃固定,自然晾干，进行SP法的IFNγ和IL4蛋白免疫组化染色。在光镜10×40倍视野下，应用CMIASH图像分析仪对阳性细胞的图像学

2、参数的积分光密度值（IOD）进行测量和统计分析。结果免疫组化结果表明，场强6×104V/ｍ的电磁脉冲能使Jurkat细胞IFNr表达持续性减少，差异非常显著（P＜0.01），而IL4变化不明显（P＞0.05）。结论EMP辐照后Th1型的细胞因子IFNγ明显减少，而Th2型的细胞因子IL4未见显著变化，提示EMP辐照后机体中受到影响的主要是细胞免疫，而体液免疫功能未受到明显影响。【关键词】电磁脉冲；Jurkat细胞；细胞因子;体视学分析Abstract:ObjectiveethodsTheJurkatcel

3、linedbyimmunohistochemicalSPmethod.stereologicalanalysisforover100.cellsontheglassslideedbyCMTASⅡimageanalysissystematamagnification400.ALLdataonggroupsonofactoranalysisofvariance.ResultsIL4hasnotstatisticallychangebutIFNrbothhasdecreased.statistically.Co

4、nclusioncellmediatedimmunitymaybeplaysanimportantroleintheinjuryofJurkatcellbyEMP.Keyagicpulse;Jurkatcell;cytokine；stereologicalanalysis电磁脉冲（electromagicpulse，EMP）是一种宽频、高能的电磁辐射，在日常生活和特殊时期（如战争时期）均能接触到，对其生物学效应的研究虽早已开展，但大多集中于神经系统的研究。近年来，EMP对免疫系统生物效应的研究日益受到关注［1,2

5、］。笔者利用高场强的电磁脉冲发生器，经场强6×104V/ｍ对Jurkat细胞进行照射，分别在即刻、1h、6h、12h、24h、48h进行免疫组织化学检测，探讨辐照后Jurkat细胞分泌细胞因子IFNγ和IL4功能的变化，旨在为进一步阐明EMP作用于免疫系统的机制奠定基础。1材料与方法　　1.1材料RPMI1640为Sigma公司产品。小牛血清为北京元亨圣马生物技术研究所产品。兔抗IFNγIgG和兔抗IL4IgG（一抗）及SP系列试剂盒［包括封闭用正常山羊血清、生物素标记的羊抗兔IgG（二抗）、辣根过氧化物

6、酶标记链霉卵白素IgG（三抗）及DAB工作液］，均购自武汉博士德生物技术有限公司。CMIASⅡ真彩色图像分析仪为北京航空航天大学的产品。1.2细胞培养Jurkat细胞由本院基础研究所郭宁教授惠赠。应用含10％灭活小牛血清RPMI1640培养液，在含8％CO2、37℃条件下培养。1.3照射方法生物医学研究用高场强电磁脉冲源由国防科技大学理学院研制，脉冲上升时间20ns，脉宽30μs，2分钟内5次，频率包含0—100MHz，场强6×104V/m。1.4免疫组化法测定IL4和IFNγ于辐照后即刻、1h、6h、1

7、2h、24h、48h、72h细胞甩片(细胞浓度>106/ml),1200转,1分钟,4%多聚甲醛4℃固定10分钟,自然晾干后4℃保存备用;免疫组化具体步骤入下:1.4℃取出后复温20分钟；2.100％→95％→90％→80％→70％梯度酒精，每种浓度1分钟，蒸馏水5分钟；3.TBS浸洗5分钟×3；4.10%H2O2TBS室温，暗视野，15分钟；5.蒸馏水冲洗两遍，TBS浸洗5分钟×3；6.0.1%胰酶消化5分钟;7.TBS浸洗5分钟×3；8.1％Triton枸橼酸钠冰浴5分钟9.蒸馏水冲洗10次，TBS

8、浸洗5分钟×3；10.加一抗：兔抗IL4/IFNr，1：100，湿盒内37℃1小时，4℃过夜；11.复温，室温，10分钟；12.TBS浸洗5分钟×3；13.加二抗：生物素化山羊抗兔IgG，1：200，37℃，作用45分钟；14.TBS浸洗5分钟×3；15.加三抗：HRPSA，1：200，37℃，作用45分钟；16.TBS浸洗5分钟×3；17.DAB显色，室温避光，2