动态浊度法定量检测复方苦参注射液中细菌内毒素论文

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1、动态浊度法定量检测复方苦参注射液中细菌内毒素论文【关键词】复方苦参注射液；,,细菌内毒素；,,动态浊度法；,,.freeletric-KiicMethodfortheMeasurementofEndotoxininpositeRadixSophoraFlavescentisInjectionAbstract：ObjectiveTodevelopanassayfordeterminationofbacterialendotoxin(BET)inpositeRadixSophoraFlavescentisInjecti

2、on.MethodsBETinedbyturbidimetrickiicmethod.ResultsThecontentinpositeRadixSophoraFlavescentisInjectiondidnotinterfereethodisprovedtobesuitablefordeterminationoftheBETinpositeRadixSophoraFlavescentisInjectionandcouldbeusedasanalternativefortherabbitpyrogentestto

3、theinjection.KeyetricKiicmethod;Interferefactorstest复方苦参注射液是苦参和白土芩溶液提取物的灭菌溶液，具有清热利湿，凉血解毒，散结止痛的功能。目前我国药品标准对注射剂采用家兔法进行热原检查。但复方苦参注射液临床用量大，且为中药制剂.freell-1，规格0.5mlAmp-1，湛江海洋生物制品检定厂）；细菌内毒素国家标准品（批号2006-3，70EUAmp-1，中国药品生物制品检定所）；细菌内毒素检查用水（批号20060208，规格10mlAmp-1，湛江海洋生物制

4、品检定厂）；BET32C细菌内毒素测定仪（天津大学无线电厂）。2方法与结果2.1细菌内毒素限值的确定［1］公式为：L=KM-1，K为规定的给药途径，即人每公斤体重每1h最大可接受的内毒素剂量，注射剂为5.0EUkg-1；M为1h每千克体重人的最大给药剂量为0.005mlkg-1，计算得样品的内毒素限值L为0.5EUml-1。2.2标准曲线制备及可靠性［1］用细菌内毒素检查用水将内毒素国家标准品进行10及2倍稀释，最终细菌内毒素浓度分别为0.5，0.25，0.125，0.0625，0.0313EUml-1稀释系列；各

5、取0.1ml分别加到预先加有0.1mlTAL试剂反应管内，混合均匀，立即插入BET32C细菌内毒素测定仪内进行自动检测，其中每一个浓度重复3管。结果见表1。回归方程：lgT=2.928-0.3037lgC，其中相关系数r=-0.9978；最低浓度λ1=0.0313EUml-1，空白对照管在检测时间外，故标准曲线成立。表1标准曲线的可靠性（略）2.3干扰实验2.3.1样品稀释倍数计算［1］公式为MVD=LCλ1-1。L为复方苦参注射液内毒素限值；C为1.0mlml-1；λ1为标准曲线的最低内毒素浓度0.0313EUm

6、l-1；计算得复方苦参注射液最大有效稀释倍数MVD为16倍。2.3.2样品溶液配制及干扰实验将复方苦参注射液用内毒素检查用水依次稀释为2，4，8，16倍溶液，记为Ai液；同时另取4管，进行同样倍数稀释，但在稀释液中添加浓度为M（4λ1）的细菌内毒素标准溶液；作为样品添加内毒素阳性对照管，记为Bi液；分别取上述各液0.1ml，加入预先加有0.10mlTAL试剂的反应管内，混匀立即插入BET-32C细菌内毒素测定仪内进行检测，其中每一个浓度重复3管，计算回收率。回收率（%）=（Bi液内毒素值-Ai液内毒素值）×M-1×

7、100%。结果见表2。表2复方苦参注射液的干扰实验（略）标准曲线：lgT=2.928-0.3037lgC，r=-0.9978。样品的添加内毒素平均回收率均在50%~200%范围内，符合《中国药典》2005年版规定，表明样品的4个浓度溶液对鲎试剂无干扰影响。2.4样品溶液正式实验分别取4批复方苦参注射液，用细菌内毒素检查用水制成4倍稀释液，记为Ai液；同时另取4管进行4倍稀释，并在稀释液中添加浓度为M（4λ1）的细菌内毒素标准溶液，记为Bi液；分别取上述各液0.1ml，加入预先加有0.10mlTAL试剂的反应管进行检

8、测，其中每一个浓度重复3管，计算回收率。结果见表3。表3复方苦参注射液正式干扰实验（略）标准曲线：lgT=2.928-0.3037lgC，r=-0.9978，4批复方苦参注射液的回收率均在50%~200%范围内，表明复方丹参注射液在本实验条件下对TAL试剂无干扰影响，因此日常检验选用4倍即可。同时进行4批供试品的家兔热原检查对比实验，结果一致，均为阳性。3讨