观赏植物组织培养第四章 基本操作.doc

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1、第四章基本操作第一节•培养基的制备任何一种培养基都是由多种化合物组成，如每次配制培养基时现配现用，影响工作效率；为减少工作量，一般常将同类药品扩大一定的倍数后，配制成浓缩液亦称母液，置冰箱中保存，可供多次使用。一、母液的配制•母液的配制是把培养基中同一大类的成分按用量配制到一起，分为：•大量元素母液•微量元素母液•铁盐母液•有机物类母液•也可将维生素和氨基酸类分别单独配制。大量元素母液的配制（MS）微量元素母液的配制(MS)铁盐的配制有机化合物的配制生长调节物的配制•生长调节物质的每一种均要单独配制。绝大多数生长调节物质不溶于水，须加入酒精、盐酸或碱促溶。生长素类•IAA、NAA溶于95

2、％的乙醇。•IBA溶于50％的酒精。•2，4－D溶于1NNaOH。•GA3溶于酒精细胞分裂素•KT、6－BA溶于1NHCl•Zt溶于95％酒精•生长调节物质的用量极微，其浓度通常以mg/mL表示。一般配制成0.1－1.0mg/mL的溶液。称量、溶解后定容至所需的容量，贴好标签，著名名称、浓度（mg/mL）、配制日期，存放于冰箱的冷藏室中，随用随取。二、培养基的配制•糖•∣•琼脂→混合→溶化→定容→调PH值•∣•药（各种母液）•1、配制培养基时，先将已配好的各种母液从冰箱中取出，按顺序排好；准备好所需的烧杯、量筒等。•2、根据所配制的培养基配方及体积数，称取琼脂和蔗糖，用少量的蒸馏水溶化。

3、•3、计算所需各种药品母液的用量，按大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节•物质母液的顺序依次吸取，混合在一起。4、将混合到一起的各种母液倒入已溶化的琼脂、糖溶液中，定容至所需的体积5、测定PH值，按培养的植物材料对PH值的要求，用1NHCl或　　1NNaOH调节所需的PH值，在培养基凝固前，分装到培养瓶中并封口。6、置高压灭菌锅中进行高压灭菌。三、培养基配方的表达•MS+6-BA1.0+IBA0.1+糖3.0%(PH5.8)•含义：1、基本培养基为MS•2、6-BA1.0即：每升培养基加入6-BA1.0mg•3、IBA0.1即：每升培养基加入IBA0.1mg•4、每升培养基加糖30

4、g第二节无菌培养体系的建立一、外植体的种类及选择•：（一）外植体的种类•1、带芽的外植体•2、分化的器官和组织•3、胚•4、花粉和花药•5、球茎、鳞茎、块茎•11/1１／1特点：•形态已基本建成，生长速度快；•遗传性稳定；•适于离体快繁；•可获得脱毒苗。•包括茎尖的顶芽、腋芽、根茎连接处的萌蘖等是组织培养中应用最多的取材部位。2、分化的器官和组织•包括：嫩茎、嫩叶、形成层、根、花瓣、花萼等二倍体组织。这些已经分化的组织经诱导后可以过渡到脱分化的状态，形成芽体或胚状体，得到完整的植株。花卉中用叶、花•瓣、花萼作为外植体的情况比较多。•特点：易发生遗传变异，不利于保持原种性；但可以扩大材料来

5、源，提高繁殖率。3、胚•指自然状态下成熟胚和未成熟胚的培养。可以使发育不完全的幼胚继续发育成植株，克服远缘杂交不育。•特点：带有极幼嫩的分生组织。4、花粉和花药•经诱导可形成单倍体植株。•从严格的组织培养的角度讲：花粉为单倍体（小孢子）；花药中的药隔、药壁、花丝为二倍体（体细胞），应引起注意。5、鳞茎、球茎、块茎•鳞茎、球茎、块茎是球根花卉组织培养中常采用的外植体。（二）外植体的选择•1、母株的选择•母株具有良好的观赏性状或特殊的基因型；最好选择在温室内栽培的母株。2、外植体的增殖能力•木本观赏植物取幼龄植株一、二年生的枝条优于老枝条，芽的再生能力强；幼嫩的叶片比老叶片的再生能力强。3、

6、外植体的大小•培养效果是一个外植体细胞总体对各因子的反应；所以外植体的表面积、体积、细胞数目影响培养效果。•外植体大，易成活，但易污染；外植体小，不易成活，污染率低。4、取材的季节与时间•休眠芽分化能力强；(1－3月份取芽)，当年形成的芽生长弱，影响分化。具体应根据培养的对象确定最佳的取材时间。如百合鳞片外植体，春秋季取材培养易形成小鳞茎，而2－3月份或5－11月所取的外植体不易形成小鳞茎。二、基本的灭菌方法•组织培养为无菌操作和无菌条件下的培养，灭菌是日常工作。•灭菌方法：分为物理灭菌和化学灭菌。（一）物理灭菌•物理方法灭菌：•利用高温、射线或滤膜过滤除菌等物理措施而实现除菌等目的。1

7、、高压蒸汽灭菌是将需灭菌的物品置高压灭菌锅内进行灭菌。常用于培养基、无菌水、接种工具、容器等的灭菌。•2、高温干热或灼烧灭菌干热灭菌：是利用烘箱加热到160－180℃（2－3小时）的温度杀死微生物。–灼烧灭菌：–是针对接种用具灭菌的。–在接种操作前或在操作过程中，将操作工具与接种材料直接接触的部分，在酒精灯的外焰上灼烧至尖端部分烧红为止，可有效杀灭微生物。是目前接种操作普遍采用的灭菌方法。•接种器械消毒器采用电加热灭菌，没有明火、安