植物组织培养基本操作

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1、2植物组织培养基本操作目的与要求了解植物组织培养的培养基种类、成分及其特点，学习植物组织培养基本操作，了解离体培养环境条件，以及炼苗移栽基本方法。具有植物组织培养基本操作程序的认知。能够识别各类培养基特点，熟悉MS培养基成分；具有制作培养基能力，具有选择外植体、表面灭菌、无菌接种等基本能力；具有植物组织培养条件控制基本能力；有进行组培苗驯化练苗的基本能力。第一节培养基成分、种类及特点第二节培养基的制备第三节外植体无菌接种第四节外植体培养第五节试管苗的驯化与移栽组织培养步骤图（1）准备阶段查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制定出切实可行的培养方案。根据

2、实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。（2）外植体的选择与消毒选择合适的部位作为外植体，采回后经过处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖、挑出花药，接种到启动培养基上。（3）启动培养接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。（4）增殖培养分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的增殖培养基经反复多次切割转接。当芽苗繁殖到一

3、定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的还要进行病毒检测。（5）生根培养刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗生根，提高其健壮度。（6）炼苗移栽选择生长健壮，有3～5条根的生根苗进行炼苗，移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗完全成活后，再移向大田。拟定培养方案外植体预处理外植体无菌接种启动培养分化出芽、胚状体或原球茎继代增殖培养生根培养炼苗移栽成活供生产使用植物组织培养的一般程序培养基配制灭菌第一节培养基成分、种类及特点植物生长必需16种基本元素：N、P、K、Ca、M

4、g、S、Fe、Mn、B、Cu、Zn、Mo、Cl、C、H、O。离体培养条件下，各元素主要从培养基中获得：H和O来源于水，C来源于添加的糖类，其它矿质元素来源于组成培养基的无机盐。培养基是根据植物生长所需营养成分，配制成的供植物生长的人工制作的营养物质。一、培养基的成分培养基一般包括无机盐、有机化合物和生长调节剂三大基本组成成分。1、无机盐类功能离体组织生长发育的基本成分根据植物对必需元素需要的量，可以分为以下两类：大量元素—植物所需元素的使用量一般在每升几十-几千毫克，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。微量元素—植物所需元素的浓度小于10-5～10-7mol/L

5、，Fe、Cu、Zn、Mn、Mo、B、Cl。除C、H、O外，其它矿质元素通常以离子态吸收N-硝态氮和铵态氮2、有机化合物培养基中只有无机盐叫做基本培养基，为使培养物更好的生长，还需添加有机成分，常用有糖类、维生素、醇类、嘌呤、氨基酸等。⑴糖类功能离体培养物生长与发育不可缺少的有机成分，即作为碳源，又维持培养基的渗透压在1.5-4.1MPa。多使用蔗糖，试管苗生长与繁殖浓度2-3%，幼胚培养4-6%，某些特殊培养中用8-10%。细胞和原生质体培养还用麦芽糖、葡萄糖、果糖。⑵维生素类功能参与酶的形成、蛋白质、脂肪代谢，明显的促进离体培养物的生长。盐酸硫胺素-VB1、盐酸吡哆

6、醇-VB6、烟酸-Vpp、生物素-VH、维生素C-Vc。⑶肌醇功能促进糖的转化、维生素和激素的利用，对胚状体和芽的形成有良好影响。用量一般50-100mg/L。⑷腺嘌呤合成各种细胞分裂素的前体物质之一，利于细胞分裂，促进芽的形成和生长。⑸氨基酸蛋白质的成分，是有机氮化合物，常用甘氨酸和多种氨基酸混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白。⑹其它复合成分成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳、香蕉汁、酵母提取液、番茄汁、麦芽糖等。3、生长调节物质⑴生长素类功能促进细胞脱分化和细胞伸长，诱导愈伤组织产生生长素与细胞分裂素协调作用，在离体培养中，生长素促进根的形成，抑制芽的形成。液体培养中利

7、于体细胞胚胎发生。常用IAA、IBA、NAA、2,4-D。IBA促进生根细胞分裂素的生理效应⑵细胞分裂素类功能促进细胞分裂和扩大，调节器官分化，延缓组织衰老，增强蛋白质合成。离体培养中，促进不定芽的发生，与生长素协调作用可有效控制培养物的生长与分化。常用6-BA、ZT、KT、2iP。植株的形态建成是CTK和IAA的比值调控的CTK/IAA高，诱导愈伤组织形成芽CTK/IAA低，诱导愈伤组织形成根烟草在不同细胞分裂素与生长素浓度下的生理效应⑶赤霉素类功能促进细胞伸长生长、诱导花芽形成、打破种子休眠以及诱导单性结实等。与生长素协调作用对形成层分化有影响，