灯盏花素对2型糖尿病大鼠肾脏肥大的抑制作用与机制研究

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1、灯盏花素对2型糖尿病大鼠肾脏肥大的抑制作用与机制研究【摘要】　　目的研究灯盏花素(Bre)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏肥大的抑制作用与机制。方法建立T2DM大鼠模型，给予灯盏花素腹腔注射治疗，测定大鼠血糖、血脂、总胆固醇、血清胰岛素水平、肾脏肥大指数和单根近端小管(PT)钠泵活性。结果与正常对照组比较，T2DM模型组血糖、血脂、总胆固醇水平都显著升高；胰岛素敏感指数(ISI)显著降低；6周组大鼠PT钠泵活性显著升高，但12周组大鼠PT钠泵活性显著降低；12周组肾脏肥大指数显著升高。与模型对照组比较，Bre治疗组血糖、血脂、总胆固醇水平都显著降低；6周组大鼠PT钠泵活性显著降低

2、，但12周组大鼠PT钠泵活性显著升高；ISI显著升高；12周组肾脏肥大指数显著降低。结论Bre能抑制T2DM大鼠肾脏肥大，其机制可能与降低血糖、血脂和总胆固醇水平，升高ISI和稳定PT钠泵活性有关。【关键词】灯盏花素;2型糖尿病;肾脏肥大;钠泵;大鼠　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectandmechanismofbreviscapine(Bre)onkidneyhypertrophyintype2diabeticrats.MethodsFemale).The6g·（kg·d）-1.Thefolloeterseasured:thebl

3、oodsugar,bloodfat,totalcholesterollevel,Krats.　　Keyellitus;Kidneyhypertrophy;Sodiumpump;Rats　　2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)患病率近年来快速增长，寻找到有效、价廉和毒副作用小的中草药用于T2DM的防治具有重要的意义。灯盏花素(breviscapine,Bre)是从灯盏花中分离出的一类黄酮类成分，主要含灯盏乙素（4,5,6-三羟基黄酮-7葡萄糖醛酸苷）、少量灯盏甲素和其它黄酮成分［1］，临床主要用于心血管疾病的治疗。据报道，Bre能够使糖尿病患者和链脲佐

4、菌素（streptozotocin，STZ）诱发的糖尿病肾病大鼠的尿蛋白减少，减轻肾脏肥大［2，3］，但其机制尚不确定。肾小管，特别是近端小管(proximaltubule,PT)管周膜上的钠泵，是肾脏实现其功能的最重要的功能蛋白。在糖尿病患者，PT钠泵活性的变化可能早于肾脏形态和结构的改变，本实验室前期证实了T2DM大鼠早期PT钠泵活性升高［4］，但是1型糖尿病大鼠出现肾脏肥大时肾皮质钠泵活性和mRNA的表达降低［5］，所以，本实验以Bre腹腔注射治疗T2DM模型大鼠，观察Bre对模型大鼠肾脏肥大的抑制作用及肾脏PT钠泵活性、胰岛素敏感指数(insulinsensitivity

5、index,ISI)等的影响。　　1器材与方法　　1.1材料与仪器灯盏花素(昆明龙津药业公司)，STZ(瑞士Alexis公司)，总胆固醇、甘油三酯检测试剂盒(南京建成生物公司)，胰岛素放射免疫检测试剂盒(北京北方生物技术研究所)，Na2ATP、哇巴因(ouabain,Sigma)，胶原酶Ⅱ、EGTA(Gibco)，［γ-32P］ATP(北京福瑞特公司)。快速血糖测定仪及(三诺SXT-1型，长沙)，SN-6930A型液闪仪与SN-6100型γ计数器(上海核所日环光电公司)。　　1.2动物及饲料3月龄雌性大鼠模型和正常对照组的建立参照本实验室以前的方法［4］。造模大鼠4周高能饲料喂养

6、后给予25mg·kg-1的STZ一次性腹腔注射，继续高能饲料喂养4周，然后采尾静脉血测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)，并计算胰岛素敏感指数(ISI)［7］，最后选取符合T2DM条件的24只大鼠作为T2DM模型(建模成功率70%)，其余淘汰。实验动物设立三大组，每组再设立两小组(n=6)，分别用于Bre治疗6周和12周的实验及对照：正常对照组(A1,A2)；模型对照组(B1,B2)，Bre治疗组(C1,C2）。治疗组经前期预试，选用最合适的Bre剂量(10mg·kg-1·d-1，临用前用5g·L-1羧甲基纤维素钠配制成2.5%的混悬液），对照组每日注射等量的羧甲基纤维

7、素钠溶液，在Bre治疗期间，全部大鼠都用常规饲料喂养，自由饮水。实验动物分别于Bre治疗6周末和12周末空腹12h，然后从心脏采血并立即处死，收集双侧肾脏标本，用滤纸吸干水分，去包膜，称重，右侧肾脏-70℃冻存备用，左侧肾脏用于PT的分离和钠泵活性测定。　　1.3.2生化及放免检测血糖采用快速血糖测定仪测定，血甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)测定均采用721分光光度计，胰岛素水平（FINS）测定采用放射免疫分析法。　　　　1.3.3单根PT的获取及其钠泵活性测定参照我们以前的方