浒苔绿藻精抗实验性肝癌作用及其机理研究

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1、浒苔绿藻精抗实验性肝癌作用及其机理研究作者：林文庭吴小南朱萍萍张智芳陈洁【摘要】　　目的探讨浒苔绿藻精抗实验性肝癌作用及其机理,为开发利用浒苔资源提供依据。方法通过接种肿瘤细胞(H22)建立小鼠实验性肝癌模型，给予不同剂量浒苔绿藻精进行干预，测定抑瘤率、脾脏指数和细胞因子白细胞介素2(IL2)、血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β(TGFβ)以判断抑癌作用及作用机理。结果低、中、高剂量浒苔绿藻精均可抑制肿瘤生长(P<0.01)，抑瘤率分别为13.9%、30.3%和27.3%;各剂量浒苔绿藻精均可显著提高小鼠的脾脏指数(P<0.01);高剂量浒苔绿藻精可显著提

2、高IL2水平(P<0.01);低、中、高剂量浒苔绿藻精均可显著降低TGFβ和VEGF水平(P<0.01)。结论浒苔绿藻精对实验性肝癌模型小鼠的肿瘤生长具有抑制作用，其抑制机理可能与其影响机体IL2、TGFβ和VEGF的水平有关。【关键词】肝肿瘤实验性藻类绿白细胞介素2转化生长因子β血管内皮生长因子　　浒苔(Enteromorpha)是一种大型绿藻，为绿藻门石莼目石莼科浒苔属的藻类植物。我国海域特别是东海海域的浒苔资源十分丰富，仅福建沿海每年产量达108kg以上，但目前大部分处于自生自灭状态，对环境和水产养殖的负面影响较大[1]。浒苔自古即为食用和药用藻类，是一种高蛋

3、白、高膳食纤维、低脂肪的食品，同时，还具有较高的药用价值。研究认为，浒苔提取物具有抑菌活性、抗单纯疱疹病毒和辛德毕斯病毒活性、提高免疫力、抑制Ehrlich氏腹水癌和皮肤癌等作用[24]。绿藻中含有丰富的蛋白多糖复合物，通常称为绿藻精(chlorellagrooLabsystemsMK3酶标仪(芬兰雷勃);光照培养箱(150C，苏州威尔实验用品有限公司)。　　1.3实验方法　　1.3.1动物分组小鼠60只，雄性，6～8周龄，体质量18～22g。随机分为6组：空白(对照)组、荷瘤模型组、氟尿嘧啶(5FU)组、浒苔CGF低、中、高剂量组，每组10只。小鼠置于塑料笼喂养，每笼5只，自由饮

4、水和摄食。动物房室温20～25℃，相对湿度60%～80%。　　1.3.2建立H22肝癌皮下移植瘤模型小鼠肝癌H22细胞经昆明种小鼠腹腔传代。无菌抽取腹腔内接种H22细胞的昆明种小鼠乳白色腹水，显微镜下细胞计数，台盼蓝染色检测肿瘤细胞存活率>95%。RPMI1640培养基调整细胞密度为5×107mL-1。经常规消毒后，荷瘤模型组、5FU组及浒苔CGF低、中、高剂量组均于右侧腋窝皮下注射0.2mL的肝癌H22细胞液，空白组注射等量生理盐水。　　1.3.3干预方法从接种H22细胞后第3天开始，空白组和荷瘤模型组以生理盐水灌胃，5FU组以20mg/kg的5FU溶液灌胃，浒苔CGF低

5、、中、高剂量组分别以200、400和800mg/kg的浒苔CGF水溶液灌胃，灌胃量均为每10g体质量0.1mL，每天1次，连续10d。各组均喂食基础饲料，自由摄食饮水，每日观察小鼠一般情况，测量小鼠体质量。　　1.4标本采集灌胃第10天晚上，禁食不禁水12h，称体质量后摘眼球取血，小鼠脱颈椎处死，剥离瘤块并取脾。　　1.5观察指标及测定　　1.5.1小鼠体质量、瘤质量、抑瘤率连续用药10d后，称取小鼠体质量，处死后完整剥离肿瘤，用电子天平称取瘤质量;在无菌条件下,剪开皮肤和腹壁，取脾脏，称质量。抑瘤率和脾脏指数分别按下式计算：　　抑瘤率(%)=(模型组平均瘤质量-实验组平均瘤质量)×1

6、00%/模型组平均瘤质量　　脾脏指数(%)=脾质量/体质量×100%　　1.5.2细胞因子IL2、VEGF和TGFβ采用双抗体夹心ELISA法测定，检定方法按照试剂盒说明书进行。　　1.6统计学处理采用SPSS10.0统计软件对数据进行统计学处理。资料先经正态分布和方差齐性检验,方差齐采用单因素方差分析(OneWayANOVA)，组间差异两两比较采用LSDt检验法。　　2结果　　实验过程中，接种肿瘤的小鼠食欲渐减，体质消瘦，肿瘤处毛发失去光泽，有部分破溃，活动量逐渐减少，其中有部分小鼠失明。　　2.1浒苔CGF对H22肝癌小鼠的肿瘤生长和脾脏指数的影响荷瘤模型组小鼠的体质量增长

7、低于空白组而高于5FU组及浒苔CGF低、中剂量组,5FU组小鼠的体质量增长均低于浒苔CGF各剂量组(均为P<0.01);浒苔CGF各剂量组和5FU组小鼠的瘤质量均明显低于荷瘤模型组(P<0.01)，抑瘤率分别为13.9%、30.3%、27.3%和21.2%;浒苔CGF各剂量组均可提高实验小鼠的脾脏指数(P<0.01)，而5FU组则降低脾脏指数(P<0.01，表1)。　　2.2浒苔CGF对H22肝癌小鼠IL2、T