石莼属和浒苔属绿藻的分析

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1、第vt卷第w期海洋与湖沼∂²¯qvto²qwusss年z月≤∞∞×≥≤∏¯¼ousss石莼属(Υλϖα)和浒苔属(Εντεροµορπηα)3绿藻的ΡΑΠ∆分析Æ杨君安利佳王茜王宏伟苏乔康晓慧k大连理工大学生物工程系大连ttystulÆk大连医科大学丹东分校丹东tt{ssul提要于t

2、

3、z年下半年在大连石庙海区采集石莼!孔石莼!砺菜!缘管浒苔!肠浒苔!管浒苔!刚毛藻等z种海藻样品o采用°技术对大连地区绿藻门石莼属和浒苔属进行了初步的分子系统学研究∀所试ys个引物中有vu个经扩增得到了uvz个多态片段∀应用°≠°软件包o按照°法和p法聚类分析的结果均表明o缘管

4、浒苔kΕντεροµορπηαλινζαl与石莼属有较近的亲缘关系o应深入探究其分类地位∀关键词石莼属浒苔属°学科分类号±z{

5、分子生物学技术的不断发展和完善o为分类学和系统学研究提供了许多新方法∀

6、s年代初o建立在°≤k聚合酶链式反应l技术基础上的°k随机扩增多态性l技术一经兴起o就因其简便!灵敏!快捷等特点而被迅速应用于基因组的多态性分析o尤其是系统学和种间亲缘关系的研究中o成为一种有效的分子标记∀近年来o°技术已经被广泛应用于高等植物和海藻分子系统学研究中k李宽钰等ot

7、

8、z~石福臣等ot

9、

10、{~°¤·2º¤µ¼εταλot

11、

12、v~²εταλot

13、

14、x

15、¤o¥~¤µ¬±ªεταλot

16、

17、y~°¤µ®εταλot

18、

19、{lo本文利用°技术对绿藻门石莼属和浒苔属基因组进行了初步的分析o以期确立一种能够有效补充传统分类方法的新手段∀1材料与方法1q1样品的采集与处理实验所用的石莼目k¯√¤¯¨¶l!石莼科k¯√¤¦¨¤¨l!石莼属kΥλϖαl中的石莼kΥλϖαλαχτυ2χαl!孔石莼kΥ.περτυσαl!砺菜kΥ.χονγλοβαταlo浒苔属kΕντεροµορπηαl中的缘管浒苔kΕν2τεροµορπηα¯¬±½¤l!肠浒苔kΕ.ιντεστιναλισl!管浒苔kΕ.τυβυλοσαl以及作为对照的刚毛

20、藻kΧλαδοπηορᶳql共计z种材料k每种ts株lo均于t

21、

22、z年下半年采自大连石庙海区∀用蒸馏水仔细清洗新鲜藻体o洗去泥砂和其它附着物o然后用滤纸吸干表面水分o用于制备∀1.2总∆ΝΑ的提取和纯化3辽宁省优秀青年科研人才培养基金资助项目o

23、yvssx号∀杨君o女o出生于t

24、zu年{月o硕士o现工作单位}大连医科大学o邮编}ttysuzo∞p°¤¬¯}º¼¤±ª∏±uyvq±¨·收稿日期}t

25、

26、

27、pstpuso收修改稿日期}t

28、

29、

30、psypstw期杨君等}石莼属kΥλϖαl和浒苔属kΕντεροµορπηαl绿藻的°分析ws

31、参照²¼¯¨等kt

32、

33、s

34、l的方法并加以改进∀样品经液氮研磨成粉末后o加入提取缓冲液≈vh≤×otss°°²¯r×µ¬¶p≤k³{qslotss°°²¯r∞×k³{qslotqw°²¯r¤2≤¯osquhkς/ςl巯基乙醇oth°∂° 于ysε温育vs°¬±o再加入trv体积x°²¯r¦o充分混匀o然后加入等体积氯仿Β异戊醇kuwΒtlo轻缓摇匀后o{sssµr°¬±离心ts°¬±∀将上清液移至新管o并加入urv体积异丙醇o将沉降下来o用zsh乙醇洗涤t)u次后o在无菌风下吹干o溶于wssΛ¯t≅×∞中kts°°²¯r×µ¬¶p≤¯ot°°²¯r∞×l∀当沉淀完全溶解后o加入¤¶¨于

35、vzε温育vs°¬±o然后重复氯仿Β异戊醇kuwΒtl的抽提步骤o在上清液中加入二倍体积无水乙醇o将纯化后的沉降下来∀沉淀吹干后溶于sqt≅×∞中备用∀1.3引物为³¨µ²±公司ƒ组!组及部分组和组引物o共计ys个∀1.4ΡΑΠ∆反应条件反应总体积为usΛ¯o其中包括ts倍缓冲液≈×µ¬¶p≤ts°°²¯rk³{qvlo≤¯xs°°²¯roª≤¯uu°°²¯r ow种§×°k每种各tssΛ°²¯rlosquΛ°²¯r引物ous±ª基因组ot单位פ´聚合酶∀1.5ΡΑΠ∆反应程序反应混合物在加入פ´聚合酶前o于

36、yε预变性ts°¬±∀待冷却后加入פ´聚合

37、酶o在°≤

38、sp扩增仪上扩增wx个循环k

39、wε变性ys¶ovyε复性{s¶ozuε延伸tws¶lo完成最后一个循环后于zuε继续延伸ts°¬±∀为避免因°技术的重复性较差而影响实验结果o作者做了多次重复实验o只将重复性较好的引物用于最终的结果分析∀并且在所有获得的片段中o只分析了稳定性较好的!大小为wxs)usss¥³的片段o未分析过大和过小的片段∀1.6电泳检测扩增产物经含sqxΛªr°¯溴化乙锭k∞l的tqwh琼脂糖凝胶电泳o在w∂r¦°电场强度下电泳v«左右o然后在紫外灯观察结果并照相∀1.7数据处理根据随机扩增片段在电场中的迁移率与碱基对数目以ts为

40、底的对数成反比o按照标准片段kp¬±§≈ r∞¦²的