不同产地布渣叶总黄酮含量及其清除自由基活性研究论文

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1、不同产地布渣叶总黄酮含量及其清除自由基活性研究论文潘天玲，李坤平，林赞菲，黄碧玲【摘要】目的测定13个不同产地布渣叶样品中总黄酮含量及其清除自由基活性。方法采用Al(NO3)3NaNO2NaOH体系比色法测定总黄酮含量，采用1,1二苯基2苦基肼自由基（DPPH·）、羟自由基（·OH）和超氧自由基（O2-·）等模型测定布渣叶总黄酮清除自由基活性。结果各产地总黄酮含量差异较大，其中以广西来宾样品含量最高，达到了55.22mg·g-1，平均为27.06mg·g-1。各产地总黄酮样品均具有清除DPPH·活

2、性.freeldifferenthabitatsandtheradicalscavengingactivityoftotalflavonoids.MethodsContentsoftotalflavonoidsintheextractsetrybasedonAl(NO3)3NaNO2NaOHreactionsystem,andtheradicalscavengingactivitytoinedinvitro.ResultsContentsoftotalflavonoidsinMicrocospani

3、culataL.variedg·g-1g·g-1.AllthesampleshadradicalscavengingactivityagainstDPPH·,·OHandO2-·.Therea公司）；氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、乙醇、甲醇、水杨酸、双氧水、硫酸亚铁、三羟甲基氨基甲烷、邻苯三酚、盐酸均为市售分析纯。布渣叶，2008年7月～9月采自广东广州、阳江、化州、顺德、中山、沙坪、阳春、龙口、电白；广西来宾、玉林、武鸣；海南儋州等地，由广州中医药大学中药学院李卫民教授鉴定为椴树科植物破布树（Microc

4、ospaniculataL.）的叶，干燥，粉碎，备用；药材存放在广东药学院制药工程教研室。2方法2.1供试品溶液的制备［6，7］精密称取不同产地布渣叶各2.500g，加入体积分数70%乙醇50mL，于30℃下超声提取2次，第1次30min，第2次20min；合并两次滤液，减压回收至无醇味，加水至100mL，静置，过滤，将滤液倒入已放有10g预处理好的D101树脂的锥形瓶中，振荡吸附12h后过滤，分别用50mL去离子水、30mL体积分数20％乙醇和30mL体积分数95％乙醇洗脱；收集体积分数95％乙醇洗脱液，

5、减压蒸干后用甲醇溶解并定容至25mL，即得。2.2标准曲线的制备［5］精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10.2mg，置50mL容量瓶内，用体积分数70%乙醇溶解并稀释至刻度，即得芦丁对照品溶液。精确吸取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.5、3.0mL芦丁对照品溶液于10mL量瓶中，分别补加体积分数70％乙醇至5mL；然后顺次加入质量分数5%NaNO2溶液0.3mL，放置6min，质量分数10%Al(NO3)3溶液0.3mL，放置6min，质量分数4%NaOH溶液4mL，再加入体积分数70%乙

6、醇溶液至刻度，摇匀，静置15min后于510nm处测定吸光度值。以吸光度A对芦丁质量（m）进行线性回归，得到回归方程：A=1.33175m-0.00449（r=0.9989）。在0.0816～0.604mg范围内，线性关系良好。2．3总黄酮含量的测定方法取各待测样0.1mL，按上述标准曲线显色方法显色后在510nm处测定吸光度值A，根据上述标准曲线方程计算总黄酮质量。2.4清除DPPH·活性测定［1，2］精密称取DPPH2.74mg，用95％乙醇溶解并定容至100mL。精密量取DPPH溶液2mL，加入0.1

7、mL经适当稀释的供试品溶液，混匀，30min后于517nm波长处测定其吸光度值，以(1)式计算清除率。E(%)=A0－AtA0×100%(1)式中，E:清除率；A0：初始DPPH溶液的吸光度；At：加入供试品溶液30min后DPPH溶液吸光度。2.5清除·OH活性测定利用Fenton反应进行测定［2,8］，标准反应体系中含9.8mmoL/LH2O22mL，9mmoL/LFeSO42mL,9mmoL/L水杨酸乙醇溶液2mL，供试品溶液2mL；以H2O2启动反应，37℃反应30min后在510nm波长处测吸光度

8、值，以(2)式计算清除率。E(%)=As－AbA0-Ab×100%(2)式中E：清除率；A0：不加H2O2反应体系吸光度；As：标准反应体系吸光度；Ab：不加供试品反应体系吸光度。2.6清除O2-·活性测定采用邻苯三酚自氧化法［2,.freeloL/L，pH8.2）4.5mL，供试品溶液0.1mL，混匀，加入2.5mmoL/L邻苯三酚溶液0.4mL,摇匀后于25℃恒温水浴反应4min，最后加入2滴盐酸（8moL/