青蒿琥酯抑制人结肠癌sw620细胞侵袭的研究论文

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1、青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究论文范钰，张尤历，姚广涛，李仪奎【摘要】目的观察中药提取物青蒿琥酯（artemisunate，ART）对结肠癌细胞侵袭的作用，并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯处理结肠癌S-1)蛋白变化。结果青蒿琥酯能有效地抑制结肠癌细胞S-1基因蛋白表达，呈时间和浓度依赖性（P0.01）。结论青蒿琥酯可明显抑制结肠癌S-1蛋白水平有关。【关键词】青蒿琥酯；结肠肿瘤；锚着不依赖性增殖；细胞间黏附分子Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsandmechanismofArtemisunateonhumanc

2、oloncancer.MethodsAftercoloncancerS-1)isunatecouldsignificantlyinhibitbothinvasionabilityandanchorageindependencegroanner.ThelevelofproteinofICAM-1isunatecaninhibitinvasionofcoloncarcinomacelllineS-1)是体内重要的免疫活性分子，与肿瘤侵袭转移具有密切的关系［2，3］。为此，本研究采用ART处理结肠癌S-1蛋白表达的影响，以探讨其抗癌机制。1材料与方法1.1材料青蒿琥酯，广西桂林

3、第二制药厂产品，用0.5%NaHCO3溶解后再用生理盐水配置成所需浓度。RPMI1640、新生小牛血清，购自GIBCO公司。人结肠癌细胞株S-1单克隆抗体购自SantaCruz公司。1.2细胞培养人结肠癌SI1640液中培养，置37℃，50ml/LCO2培养箱中。每日观察，待细胞至对数生长期，采用不同浓度的青蒿琥酯处理后，然后准备进行以下实验。1.3软琼脂集落培养实验1.3.1制备细胞悬液将处理组及对照组细胞用含0.01%EDTA的0.25%胰酶消化，制备单细胞悬液，调整细胞浓度为2×103细胞/ml，置室温备用。1.3.2制备底层琼脂将1%的琼脂凝胶于微波炉完全溶化后放

4、置45℃水浴中，温度平衡后与等体积45℃预温的汉20%新生小牛血清的RPMI1640培养液混匀，加入6孔板中，每孔4ml，置超净台中室温放置，令其充分凝固。剩余的琼脂粉/培养基混合物置于42℃水浴中待用。1.3.3制备上层琼脂取42℃保温的琼脂粉/培养基混合物1.2ml与0.8ml细胞悬液混合，迅速混匀，取1ml铺于底层琼脂上，每个样品三复孔。同时做空白阴性对照及溶剂对照。置培养板于超净台室温待其充分凝固后，移入37℃，5%，CO2孵箱中培养14d。1.3.4计数倒置显微镜下随机计数每组样品10个视野中的集落数，取其平均数作比较。结果采用方差分析。1.4体外侵袭抑制实验该

5、实验在改良的Boyden小室中操作，根据文献方法［4］进行。Boyden小室的上下室之间隔以孔径为8μm的聚碳酸酯膜，膜上铺匀1∶2稀释的基底膜胶（Matrigel）。下室加预先制备的NIH3T3细胞培养上清液作为趋化因子，上室加入50～800μl待测的肿瘤细胞悬液。置于37℃，5%CO2培养箱中温育12h，弃去上室液体，取出聚碳酸酯膜，用棉签仔细擦尽膜上Matrigel及未穿过的细胞，甲醛固定5min，HE染色。400倍光镜下计数穿过聚碳酸酯膜的细胞数，以侵袭细胞的相对数目表示肿瘤细胞侵袭能力。随机计数5个视野内的细胞数，取平均值进行统计处理，每组计数3份样本。1.5I

6、CAM-1基因蛋白检测按照上述时间收集各组细胞，提取细胞总蛋白，蛋白定量后进行常规-1基因表达的影响本研究采用-1蛋白水平的影响。结果发现，ART各个剂量组在作用细胞24h后，ICAM-1蛋白表达就开始出现降低；随着作用时间的延长，ICAM-1蛋白降低更加明显，到72h时非常显著。同时发现，ICAM-1蛋白水平降低与ART作用浓度密切相关。见图3。3讨论正常真核细胞，除成熟血细胞外，大多须粘附于特定的细胞外基质上才能抑制凋亡而存活，称为锚着依赖性（anchoragedependence）。一般认为，肿瘤细胞在软琼脂形成集落的多少可反映肿瘤细胞锚着不依赖性增殖的特性，且与其

7、恶性程度呈正相关。癌细胞侵袭能力强，则在软琼脂上形成的集落数目多。本研究发现，经不同浓度的青蒿琥酯处理的癌细胞软琼脂集落数明显受到抑制。说明，青蒿琥酯可在一定程度上抑制结肠癌细胞的侵袭能力。肿瘤细胞本身的运动能力和侵袭力在肿瘤转移过程中发挥重要作用，运动能力不仅是肿瘤细胞侵袭周围组织，而且是侵入血管和穿出血管所必须。从理论上讲，抑制肿瘤细胞运动将抑制肿瘤细胞的浸润和转移。一旦肿瘤细胞从原发肿瘤上脱落，它们将侵入宿主的细胞外基质,然后，穿透淋巴管和血管。为此，肿瘤细胞的侵袭必须穿透血管周围的细胞外基质。本研究所用的基质胶(mat