青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究

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1、青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究作者：范钰，张尤历，姚广涛，李仪奎【摘要】　　目的观察中药提取物青蒿琥酯对结肠癌细胞侵袭的作用，并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯处理结肠癌SW620细胞，以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖，以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力，以Westernblot方法检测细胞间黏附分子-1(intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)蛋白变化。结果青蒿琥酯能有效地抑制结肠癌细胞SW620的恶性增殖和侵袭能力，且呈剂量依赖性。青蒿琥酯能有效地抑制癌细胞ICAM-1基因蛋白表达

2、，呈时间和浓度依赖性。结论青蒿琥酯可明显抑制结肠癌SW620细胞侵袭，其机制可能与下调ICAM-1蛋白水平有关。【关键词】青蒿琥酯；结肠肿瘤；锚着不依赖性增殖；细胞间黏附分子Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsandmechanismofArtemisunateonhumancoloncoloncancerSW620cellsweretreatedwithdifferentdosesofArtemisunate,thegrowthofanchorageindependenceofcancercellswasstudiedinsoftag

3、arcolonyformation,andinvasionabilitywasdeterminedbyBoydenchamber,andtheprotEinlevelofintercellularadhesionmolecule-1(ICAM-1)wasdetectedbyWesternblotassay.ResultsArtemisunatecouldsignificantlyinhibitbothinvasionabilityandanchorageindependencegrowthinadose-dependentmanner.ThelevelofprotEIn

4、ofICAM-1wasdown-regulatedascomparedwithcontrolcaninhibitinvasionofcoloncarcinomacelllineSW620throughdown-regulatingICAM-1expression.Keywords：Artemisunate；Coloncarcinoma；Anchorageindependencegrowth；Intercellularadhesionmolecule-1　　青蒿琥酯是中药青蒿提取物的衍生物，研究发现，ART具有重要的抗肿瘤作用［1］，但在胃肠道肿瘤细胞研究极少。细胞间黏附

5、分子-1(intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)是体内重要的免疫活性分子，与肿瘤侵袭转移具有密切的关系［2，3］。为此，本研究采用ART处理结肠癌SW620细胞，观察了ART对结肠癌细胞锚着不依赖性增殖、侵袭和ICAM-1蛋白表达的影响，以探讨其抗癌机制。　1材料与方法材料青蒿琥酯，广西桂林第二制药厂产品，用%NaHCO3溶解后再用生理盐水配置成所需浓度。RPMI1640、新生小牛血清，购自GIBCO公司。人结肠癌细胞株SW620，浙江大学肿瘤研究所冻存。ICAM-1单克隆抗体购自SantaCruz公司。细胞培养人结肠癌SW620

6、细胞在含15%新生小牛血清的RPMI1640液中培养，置37℃，50ml/LCO2培养箱中。每日观察，待细胞至对数生长期，采用不同浓度的青蒿琥酯处理后，然后准备进行以下实验。软琼脂集落培养实验制备细胞悬液将处理组及对照组细胞用含%EDTA的%胰酶消化，制备单细胞悬液，调整细胞浓度为2×10细胞/ml，置室温备用。制备底层琼脂将1%的琼脂凝胶于微波炉完全溶化后放置45℃水浴中，温度平衡后与等体积45℃预温的汉20%新生小牛血清的RPMI1640培养液混匀，加入6孔板中，每孔ml，置超净台中室温放置，令其充分凝固。剩余的琼脂粉/培养基混合物置于42℃水浴中待用。制备上层琼脂

7、取42℃保温的琼脂粉/培养基混合物与细胞悬液混合，迅速混匀，取1ml铺于底层琼脂上，每个样品三复孔。同时做空白阴性对照及溶剂对照。置培养板于超净台室温待其充分凝固后，移入37℃，5%，CO2孵箱中培养1d。计数倒置显微镜下随机计数每组样品10个视野中的集落数，取其平均数作比较。结果采用方差分析。体外侵袭抑制实验该实验在改良的Boyden小室中操作，根据文献方法［4］进行。Boyden小室的上下室之间隔以孔径为μm的聚碳酸酯膜，膜上铺匀1∶2稀释的基底膜胶。下室加预先制备的NIH3T3细胞培养上清液作为趋化因子，上室加入50～800μl待测