胆囊癌对化疗药物敏感性的研究

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1、胆囊癌对化疗药物敏感性的研究作者：周程，胡思安，龚昭，阮剑【摘要】目的研究化疗药物对胆囊细胞的敏感性。方法应用MTT法及流式细胞仪，选择6种化疗药物作用于胆囊癌细胞株，进行化疗药物敏感性的检测。结果MTT法及流式细胞法测定6种化疗药物对胆囊癌细胞的敏感性，由高至低依次为顺铂(DDP)34.77±3.53、丝裂霉素(MMC)33.25±3.40、卡铂(CDB)15.73±4.50、阿霉素(ADM)15.52±3.56、甲氨蝶呤(MTX)14.5±2.13、长春新碱(VCR)8.5±1.95。结论6种化疗药物以DDP、

2、MMC较敏感，CDB、ADM、MTX次之，VCR最差。【关键词】胆囊癌；化疗；流式细胞仪【Abstract】ObjectiveTostudythesensitivityoftheprimarygallbladdercarcinomatochemotherapeuticdrugs.MethodsAnalyzedbyMTTmethodsandcytofluorometry，thesensitivitydetectionof6kindsofchemotherapeuticdrugstogallbladdercarcino

3、macellstrain.ResultsAllofthesixantitumordrugsethodsandcytofluorometry，theyhightoloitomycinC(MMC)33.25±3.40，carboplatin(CDB)15.73±4.50，adriamycin(ADM)15.25±3.56，methotrexate(MTX)14.5±2.13，vincristine(VCR)8.5±1.95.ConclusionDDPandMMCaremorechemosensitivethanCDB，

4、ADMandMTXespeciallythanVCR.【Keya；chemotherapy；cytofluorometry原发性胆囊癌是一种恶性程度高且预后较差的胆系恶性肿瘤，占消化系统恶性肿瘤的第五位，近年来的统计结果表明，其发病有增高趋势［1］。虽然在诊断技术，及治疗方法上有所发展，但治疗5年生存率仅有5%～10%的水平。手术治疗仍然是目前胆囊癌治疗的首选方法，但手术切除率低依然是困扰胆囊癌治疗方法的主要原因，因此，药物化疗就显得至关重要。但目前针对胆囊癌的化疗效果欠佳，且国内外尚无统一、公认显效的联合用药方案

5、。我们选择了5种化疗药物，采用MTT及流式细胞仪(FCM)方法检测其药物敏感性，以期找到临床合理运用化疗方案的科学依据，从而使化疗个体化。本实验研究的结果报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞来源胆囊癌细胞系(山东医科大学外科陈博教授提供)。1.1.2药物顺铂、阿霉素、丝裂霉素、卡铂、长春新碱、甲氨蝶呤。1.1.3试剂及仪器RPMI1640培养基及小牛血清由北京中山公司提供，四甲基偶氮唑盐(MTT)及二甲基亚砜(DMSO)由Sigma公司提供，自动酶标读数仪(国产DG-3022)，流式细胞仪FACScort

6、(BectonDickinson)。1.2方法（1）胆囊癌细胞在含100%小牛血清的1640培养基，37℃，5%CO2培养箱中生长。取对数生长期的细胞以每孔5×104个细胞接种于96孔细胞培养板中，37℃，5%CO2条件下培养48h。把所有细胞分为6个实验组和1个对照组，6种不同浓度的化疗药物浓度为［药物浓度计算公式为：药物浓度(μg/ml)=60×D/5000÷50%×103，D为临床用药剂量(mg/kg·d)，60为平均成人体重(kg)，50%为红细胞压积，乘103后将mg换算成μg］DDP40μg/mg、MM

7、C2μg/ml、ADM40μg/ml、CDB300μg/ml、MTX5μg/ml、VCR1μg/ml。分别加入6个实验组中，使每孔最终体积为200μl，每个浓度设3个复孔。以无化疗药物的细胞液为空白对照，作用48h后，每孔加1mg/ml的MTT0.1ml；继续培养4h后加DMSO溶液0.1ml，温育30min；在自动酶标读数仪上比色，波长570nm，测出每孔OD值(吸光度值)，结果以高度敏感(抑制率＞70%)，中度敏感(抑制率50%～70%)，不敏感(抑制率<50%)判定。抗肿瘤药物对肿瘤细胞抑制率=(1-实

8、验组吸光度值/肿瘤细胞对照组吸光度值)×100%。（2）流式细胞仪药敏检测法按（1）所计算浓度分别温育6组胆囊癌细胞48h，并以不加药物的RPMI1640细胞培养液作阴性对照，收集胆囊癌细胞，PBS洗涤后，4℃下75%乙醇固定12h以上，离心除去乙醇，PBS洗涤，各组加入10mg/mlRNA酶溶液150μl，37℃水浴30min，加入碘化丙啶(PI)，用30