胆囊癌对化疗药物敏感性的研究论文

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1、胆囊癌对化疗药物敏感性的研究论文.freelarygallbladdercarcinomatochemotherapeuticdrugs.MethodsAnalyzedbyMTTmethodsandcytofluorometry，thesensitivitydetectionof6kindsofchemotherapeuticdrugstogallbladdercarcinomacellstrain.ResultsAllofthesixantitumordrugsethodsandcytofluorometry

2、，theyhightoloitomycinC(MMC)33.25±3.40，carboplatin(CDB)15.73±4.50，adriamycin(ADM)15.25±3.56，methotrexate(MTX)14.5±2.13，vincristine(VCR)8.5±1.95.ConclusionDDPandMMCaremorechemosensitivethanCDB，ADMandMTXespeciallythanVCR.【Keya；chemotherapy；cytofluorometry原发性胆囊癌

3、是一种恶性程度高且预后较差的胆系恶性肿瘤，占消化系统恶性肿瘤的第五位，近年来的统计结果表明，其发病有增高趋势［1］。虽然在诊断技术，及治疗方法上有所发展，但治疗5年生存率仅有5%～10%的水平。手术治疗仍然是目前胆囊癌治疗的首选方法，但手术切除率低依然是困扰胆囊癌治疗方法的主要原因，因此，药物化疗就显得至关重要。但目前针对胆囊癌的化疗效果欠佳，且国内外尚无统一、公认显效的联合用药方案。我们选择了5种化疗药物，采用MTT及流式细胞仪(FCM)方法检测其药物敏感性，以期找到临床合理运用化疗方案的科学依据，从而使化疗

4、个体化。本实验研究的结果报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞来源胆囊癌细胞系(山东医科大学外科陈博教授提供)。1.1.2药物顺铂、阿霉素、丝裂霉素、卡铂、长春新碱、甲氨蝶呤。1.1.3试剂及仪器RPMI1640培养基及小牛血清由北京中山公司提供，四甲基偶氮唑盐(MTT)及二甲基亚砜(DMSO)由Sigma公司提供，自动酶标读数仪(国产DG-3022)，流式细胞仪FACScort(BectonDickinson)。1.2方法（1）胆囊癌细胞在含100%小牛血清的1640培养基，37℃，5%CO2培养箱中

5、生长。取对数生长期的细胞以每孔5×104个细胞接种于96孔细胞培养板中，37℃，5%CO2条件下培养48h。把所有细胞分为6个实验组和1个对照组，6种不同浓度的化疗药物浓度为［药物浓度计算公式为：药物浓度(μg/ml)=60×D/5000÷50%×103，D为临床用药剂量(mg/kg·d)，60为平均成人体重(kg)，50%为红细胞压积，乘103后将mg换算成μg］DDP40μg/mg、MMC2μg/ml、ADM40μg/ml、CDB300μg/ml、MTX5μg/ml、VCR1μg/ml。分别加入6个实验组中

6、，使每孔最终体积为200μl，每个浓度设3个复孔。以无化疗药物的细胞液为空白对照，作用48h后，每孔加1mg/ml的MTT0.1ml；继续培养4h后加DMSO溶液0.1ml，温育30min；在自动酶标读数仪上比色，波长570nm，测出每孔OD值(吸光度值)，结果以高度敏感(抑制率＞70%)，中度敏感(抑制率50%～70%)，不敏感(抑制率50%)判定。抗肿瘤药物对肿瘤细胞抑制率=(1-实验组吸光度值/肿瘤细胞对照组吸光度值)×100%。（2）流式细胞仪药敏检测法按（1）所计算浓度分别温育6组胆囊癌细胞48h，并

7、以不加药物的RPMI1640细胞培养液作阴性对照，收集胆囊癌细胞，PBS洗涤后，4℃下75%乙醇固定12h以上，离心除去乙醇，PBS洗涤，各组加入10mg/mlRNA酶溶液150μl，37℃水浴30min，加入碘化丙啶(PI)，用300目尼龙网过滤后4℃下放置15min，转而进行FACScan激光流式细胞仪检测，资料经CellQuest软件收集和分析。1.3统计学方法采用SAS统计软件进行Student-t检验。2结果2.1MTT法测定化疗药物的平均抑制率不同的化疗药物对胆囊癌细胞的抑制率不同，体外MTT的试验

8、表明，胆囊癌细胞对顺铂及丝裂霉素有较高的敏感性。见表1。表1MTT法测定化疗药物的平均抑制率（%）注：*临床上以抑制率大于50%为敏感2.2流式细胞法测定化疗药物的杀伤率不同的化疗药物对胆囊癌细胞的杀伤率不同，流式细胞仪药敏测法分析6种药物之中，顺铂、丝裂霉素、阿霉素、卡铂、甲氨蝶呤与对照组相比差异有非常显著性（P0.01）；顺铂与丝裂霉素之间，以及阿霉素、卡铂、甲氨蝶呤之间相比均差异