胆囊癌对化疗药物敏感性的研究

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1、胆囊癌对化疗药物敏感性的研究作者：周程，胡思安，龚昭，阮剑【摘要】目的研究化疗药物对胆囊细胞的敏感性。方法应用MTT法及流式细胞仪，选择6种化疗药物作用于胆囊癌细胞株，进行化疗药物敏感性的检测。结果MTT法及流式细胞法测定6种化疗药物对胆囊癌细胞的敏感性，由高至低依次为顺铂(DDP)±、丝裂霉素(MMC)±、卡铂(CDB)±、阿霉素(ADM)±、甲氨蝶呤(MTX)±、长春新碱(VCR)±。结论种化疗药物以DDP、MMC较敏感，CDB、ADM、MTX次之，VCR最差。【关键词】胆囊癌；化疗；流式细胞仪【Abstract】ObjectiveTostudythesensitivityofthepr

2、imarygallbladdercarcinomatochemotherapeuticdrugs.MethodsAnalyzedbyMTTmethodsandcytofluorometry，thesensitivitydetectionofkindsofchemotherapeuticdrugstogallbladdercarcinomacellstrain.ResultsAllofthesixantitumordrugswasevaluatedbyMTTmethodsandcytofluorometry，theywere(fromhightolow)：cisplatin(DDP)±，mit

3、omycinC(MMC)±，carboplatin(CDB)±，adriamycin(ADM)±，methotrexate(MTX)±，vincristine(VCR)±ConclusionDDPandMMCaremorechemosensitivethanCDB，ADMandMTXespeciallythanVCR.【Keywords】gallbladdercarcinoma；chemotherapy；cytofluorometry原发性胆囊癌是一种恶性程度高且预后较差的胆系恶性肿瘤，占消化系统恶性肿瘤的第五位，近年来的统计结果表明，其发病有增高趋势［1］。虽然在诊断技术，及治疗方法上有所

4、发展，但治疗5年生存率仅有5%～10%的水平。手术治疗仍然是目前胆囊癌治疗的首选方法，但手术切除率低依然是困扰胆囊癌治疗方法的主要原因，因此，药物化疗就显得至关重要。但目前针对胆囊癌的化疗效果欠佳，且国内外尚无统一、公认显效的联合用药方案。我们选择了5种化疗药物，采用MTT及流式细胞仪(FCM)方法检测其药物敏感性，以期找到临床合理运用化疗方案的科学依据，从而使化疗个体化。本实验研究的结果报告如下。1材料与方法材料细胞来源胆囊癌细胞系(山东医科大学外科陈博教授提供)。药物顺铂、阿霉素、丝裂霉素、卡铂、长春新碱、甲氨蝶呤。试剂及仪器RPMI1640培养基及小牛血清由北京中山公司提供，四甲基偶氮

5、唑盐(MTT)及二甲基亚砜(DMSO)由Sigma公司提供，自动酶标读数仪(国产DG-302)，流式细胞仪FACScort(BectonDickinson)。方法胆囊癌细胞在含100%小牛血清的1640培养基，37℃，5%CO培养箱中生长。取对数生长期的细胞以每孔5×104个细胞接种于96孔细胞培养板中，37℃，5%CO2条件下培养48h。把所有细胞分为6个实验组和1个对照组，6种不同浓度的化疗药物浓度为［药物浓度计算公式为：药物浓度(μg/ml)=60×D/5000÷50%×103，D为临床用药剂量(mg/kg·d)，60为平均成人体重(kg)，50%为红细胞压积，乘103后将mg换算成μ

6、g］DDP0μg/mg、MMCμg/ml、ADM0μg/ml、CDB00μg/ml、MTXμg/ml、VCR1μg/ml。分别加入6个实验组中，使每孔最终体积为200μl，每个浓度设3个复孔。以无化疗药物的细胞液为空白对照，作用48h后，每孔加1mg/ml的MTT；继续培养4h后加DMSO溶液，温育30min；在自动酶标读数仪上比色，波长570nm，测出每孔OD值(吸光度值)，结果以高度敏感(抑制率＞70%)，中度敏感(抑制率0%～70%)，不敏感(抑制率统计学方法采用SAS统计软件进行Student-t检验。2结果MTT法测定化疗药物的平均抑制率不同的化疗药物对胆囊癌细胞的抑制率不同，体外

7、MTT的试验表明，胆囊癌细胞对顺铂及丝裂霉素有较高的敏感性。见表1。表1MTT法测定化疗药物的平均抑制率注：*临床上以抑制率大于50%为敏感流式细胞法测定化疗药物的杀伤率不同的化疗药物对胆囊癌细胞的杀伤率不同，流式细胞仪药敏测法分析6种药物之中，顺铂、丝裂霉素、阿霉素、卡铂、甲氨蝶呤与对照组相比差异有非常显著性；顺铂与丝裂霉素之间，以及阿霉素、卡铂、甲氨蝶呤之间相比均差异无显著性(P＞)；长春新碱与上述5种药