pkcγ参与异氟醚预处理大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用论文

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1、PKCγ参与异氟醚预处理大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用论文【摘要】目的探讨异氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用与额叶大脑皮质蛋白激酶Cγ亚型（PKCγ）蛋白表达的关系。方法雄性SD大鼠48只，实验分行为学加脑梗死灶体积测定和免疫组织化学实验2轮进行，每轮24只，随机分为假手术组、缺血再灌注组、异氟醚预处理组（n=8）。采用大脑中动脉线栓法阻断前脑血供2h、再灌注24h制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。异氟醚预处理组于缺血前1.5h经半密闭的吸入箱吸入异氟醚（呼气末浓度维持1.5%），持续1h。再灌注24h后用Z

2、eaLonga评分法进行神经功能缺陷评分，TTC染色法测大鼠脑梗死体积，免疫荧光法测定额叶大脑皮质PKCγ蛋白表达。结果与假手术组比较，缺血再灌注组和异氟醚预处理组神经功能缺陷评分、脑梗死体积增加；缺血再灌注组额叶大脑皮质PKCγ表达减少.freelia-reperfusioninjuryandtheexpressionofgammaisoformofproteinkinaseC（PKCγ）inrats.MethodsTaleSDratslyallocatedintosham-operation,ischemia-reper

3、fusion（I/R）andisofluranepreconditionedI/Rgroups（n=8each）.Usingtheintraluminalfilamenttechniqueunderchloralhydrateanesthesia,theI/Rratsiddlecerebralarteryocclusion（MCAO）.Tothepreconditioninggroup,1.5%isofluraneinhalation（0=nodeficit,.freelinedbyTTCstainingandquantit

4、ativeimageanalysis,andthePKCγproteinexpressioninthefrontallobeofcerebralcortexmunofluorescence,24hoursafterreperfusion.ResultsTheneurologicdeficitandinfarctsizeinI/Rgroup-operationgroup,theexpressionofPKCγinfrontallobeechanismoftheprotectiveeffectofisofluraneprecon

5、ditioningagainstfocalcerebralI/RinjuryinratsislikelytobetheupregulationofPKCγexpressioninthefrontallobeofcerebralcortex.Keyia-reperfusion;PKC脑缺血是麻醉和手术过程中常见的并发症，防治脑缺血的方法及脑保护的机制一直是研究的重点之一。大量研究显示，异氟烷预处理能产生与缺血预处理相似的脑保护作用，但其确切机制仍未阐明［1］。目前吸入麻醉药的脑保护的研究重点主要集中在腺苷受体、NMDA受体、G

6、ABA受体、线粒体ATP敏感钾通道（mito-KATP）及MAPK信号通路等方面［2］。蛋白激酶C（proteinkinaseC，PKC）是细胞内信息转导通路的关键成分，与上述各种机制皆有着密切联系，并且已有实验证实PKC激活参与异氟醚预处理诱导的脑缺血耐受的形成［1］。PKCγ（PKCgamma）是典型性PKC的一种亚型，仅在脑和脊髓分布，因此我们推测它在脑缺血损伤的保护中可能起关键作用。本研究主要探讨PKCγ在异氟醚抗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用。1材料和方法1.1实验动物、分组和药品成年雄性SD大鼠48只，体重2

7、50～300g，由徐州医学院实验动物中心提供。实验分行为学加脑梗死灶体积测定和免疫组织化学实验2轮进行，每轮24只，随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组和异氟醚预处理组，每组8只。异氟醚（批号0603005）购自山东科源制药有限公司，PKCγ单克隆抗体和荧光二抗均为Sigma公司产品。1.2局灶性脑缺血再灌注模型（middlecerebralarteryocclusion，MCAO）制备模型制备方法参照文献［3］。大鼠腹腔注射水合氯醛300mg/kg麻醉后，取仰卧位固定，备皮，碘伏消毒，取颈区正中切口，钝性分离左侧颈部肌肉，

8、分离结扎颈总动脉、颈外动脉及其分支;在颈总动脉分叉处剪一切口，用直径约0.24mm的尼龙线，烧灼头端使其直径为0.25～0.28mm，经小口插入颈内动脉约（21±1）mm，遇有轻微阻力，表明栓线已越过大脑中动脉起始端到达近端，将大脑中动脉起始端阻塞，结扎颈内动脉，栓线外端留出约5mm长，缝