端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用论文

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1、端粒酶正义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长的作用论文.freelolL-1正义寡核苷酸与E1细胞共培养6，12，24和48h时抑制率分别为16.3%，15.6%，20.2%和26.3%.freelolL-1时抑制率分别为22.5%，21.5%，32.4%和39.9%;在E2Z细胞，浓度为1.5μmolL-1时抑制率分别为7.7%，25.2%，27.0%和28.8%，浓度为4.5μmolL-1时抑制率分别为18.1%，30.1%，32.8%和32.9%;同时流式细胞仪检测到凋亡峰，含量分别为25.3%和19.3%.无义寡核苷酸无此作用.结论端粒酶正义寡核苷酸可抑制

2、鼻咽癌细胞的生长.Keys;telomerase;senseoligodeoxynucleotides;cellcycleAbstract:AIMToinvestigatetheeffectsoftelomerasesenseoligodeoxynucleotideonthegroacells.METHODSTelomerasesenseoligodeoxy-nucleotide（SODN），antisenseoligodeoxynucleotide（A-SODN）andnonsenseoligodeoxynucleotide（NODN）aE1andE2

3、Zcellsbyusinglipofectinmediation，theproliferationofcellseasuredbyMTTmethod，andcellcycleeasuredeter（FCM）.RESULTSSODNinhibitedthegroe-dependentmanner.AfterbeingtreatedolL-1SODNfor6，12，24and48h，theinhibitionratesolL-1SODN，theinhibitionrateseraseSODNcouldinhibitthegroacells.0引言端粒是位于染

4、色体末端的特殊DNA重复序列，其长度的维持除端粒酶激活途径外，还有其他非酶途径，但具体情况还不清楚［1-4］.端粒酶RNA是合成端粒的模板，因此，针对端粒酶RNA（telomeraseRNA，hTR）模板区的端粒酶正义寡核苷酸可以和端粒DNA互补结合.这种结合是否能影响端粒长度的维持，从而影响肿瘤细胞的生长，是一个有意义的问题.我们通过应用端粒酶正义寡核苷酸作用于鼻咽癌E1和E2Z细胞，观察鼻咽癌细胞的生长状况，来探讨端粒酶正义寡核苷酸对肿瘤细胞生长的影响，为肿瘤防治提供新思路.1材料和方法1.1材料高分化鼻咽癌细胞株E1和低分化鼻咽癌细胞株E2Z为本室

5、提供，常规培养于含100mLL-1新生小牛血清的RPMI1640培养液中，实验用对数生长期细胞.端粒酶正义寡核苷酸（senseoligodeoxynucleotide，SODN）、反义寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotide，ASODN）及无义寡核苷酸（nonsenseoligodeoxynucleotide，NODN）由上海博彩生物技术公司合成，全硫代修饰;SODN序列:5’-CTAACCCTAAC-3’，与hTR模板区合成端粒的11个碱基序列（46～56）完全相同，ASODN序列:5’-GTTAGGGTTAG-3’，互补于

6、hTR模板区合成端粒的11个碱基序列（46～56）.1.2方法寡核苷酸的脂质体包裹转染及分组:寡核苷酸（oligodeoxynucleotide，ODN）分别溶于不含血清及抗生素的RPMI1640培养液中，加入同样方法稀释的阳离子脂质体lipofectin（Gibco）液中，二者混匀，室温放置10～15min，使之形成脂质体-ODN复合物，用于转染.转染前，用无血清无抗生素培养液漂洗细胞1次，分为SODN，ASODN，NODN，脂质体和空白对照组.分别加入终浓度为1.5，3.0，4.5和6.0μmolL-1的SODN及终浓度为4.5μmolL-1的ASO

7、DN和NODN，脂质体组加入只含脂质体的无血清无抗生素培养液，空白对照组加入相同量的无血清无抗菌素培养液.培养24h时，再加入1/3初始剂量的SODN，ASODN，NODN，脂质体培养液及空白培养液.细胞增殖能力检测采用MTT法:对数生长期细胞接种于96孔培养板，细胞密度为2.5×107L-1，每孔0.2mL.在ODN与细胞共培养6，12，24和48h时加MTT（5gL-1）10μL，继续培养4h，吸出培养液，加DMSO100μL孔-1，全自动酶标仪测定波长570～630nm的A值.每组设4个复孔，实验重复3次，计算各组均值.并计算生长抑制率［（未处理组

8、A值-处理组A值）/未处理组A值×100%］.细胞周期分析采用流式细胞仪检测:终