avermectin b1a组分高产菌株的诱变育种论文

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1、AvermectinB1a组分高产菌株的诱变育种论文任超马王向坡李宝库路新利【关键词】Avermectin,B1a组分；,诱变；,效价；,高产菌株摘要：目的了解avermectin产生菌S.avermitilis的生长特性，提高产生菌B1a组分的产量。方法采用紫外线、诱变剂亚硝基胍并结合甲硫氨酸诱变等手段对出发菌株S.avermitilisN56进行诱变处理，初筛、复筛。结果筛选获得总效价达到45258μg/ml的高产除虫链霉菌突变株A3，B1a比例提高到560%。结论采用紫外线及亚硝基胍诱变方法，结合甲硫氨酸诱变筛选，与出发菌株相比可以获得ave

2、rmectin总效价及B1a组分显著提高的菌株。关键词：AvermectinB1a组分；诱变；效价；高产菌株ABSTRACTObjectiveTostudythecharacteristicsofavermectinproducingstrainsandimproveavermectinB1ayieldofStreptomycesavermitilis.MethodUVandNTGutagenstotreattheoriginalstrainN56asethionineasinducer.ResultsThehighyieldavermectins

3、trainA3ectintotaltiterupto45258μg/mlectinB1aethodofscreeninghighyieldavermectinB1athroughmutationbyUVandNTGandinductionethionine.KEYutagenesis;Titer;HighavermectinproducingstrainAvermectin的产生菌是除虫链霉菌(Streptomycesavermitilis)，该菌株是1975年日本北里研究所(KitasatoInstitute)从日本静岗县地区的一个土壤样品中分离

4、得到的。研究初期已发现该菌株的发酵液具有很高的驱肠道寄生虫活性，该菌株后被送到美国Merck公司作进一步研究。1976年.freelectins［1］。Avermectins是一类结构相似的十六元大环内酯类抗生素，共有8个组分，分别命名为A1a、A1b、A2a、A2b、B1a、B1b、B2a和B2b。其中A1a、A2a、B1a和B2a为4个大量组分，含量在80%以上；A1b、A2b、B1b和B2b为4个小量组分，含量在20%以下，结构见图1。B1的杀虫活性最高，毒性最小。近年，众多科研工作者通过诱变等手段改造菌种的遗传特性，提高avermectin

5、有效组分B1比例，大村智等在这方面做了很多贡献［2］。AvermectinB1a(大于80%)和B1b(小于20%)混合物阿巴菌素(abamectin)已用于畜牧抗虫和农业上的杀螨及选择性的杀虫剂。AvermectinsR1XYR2A1aCH3CH=CHC2H5A1bCH3CH=CHCH3A2aCH3CH2-CH(OH)C2H5A2bCH3CH2-CH(OH)CH3B1aHCH=CHC2H5B1bHCH=CHCH3B2aHCH2-CH(OH)C2H5B2bHCH2-CH(OH)CH3图1Avermectins结构图1材料和仪器1.1菌种除虫链霉菌S

6、.avermitilisN56由河北大学微生物研究所提供；突变株A3由甲硫氨酸平板筛选获得。1.2试剂生理盐水，亚硝基胍(NTG)，磷酸盐缓冲液(pH60)，甲硫氨酸(Met)，丙酮(分析纯)，乙酸乙酯(分析纯)，无水甲醇(色谱纯及分析纯)，GF254硅胶粉，三氯甲烷(分析纯)，二氯甲烷(分析纯)。1.3培养基斜面和分离培养基(g/L)可溶性淀粉10，(NH4)2SO425，NaCl06，MgSO47H2O12，K2HPO43H2O30，CaCO330，琼脂粉20，pH72～74，用蒸馏水配制。种子培养基(g/L)玉米淀粉25，花生饼粉10，黄豆饼

7、粉80，酵母粉50，酵母膏50，玉米浆40，CoCl26H2O0003，淀粉酶00025，pH70～72，用自来水配制。发酵培养基(g/L)玉米淀粉70，花生饼粉10，黄豆饼粉80，酵母粉50，酵母膏30，玉米浆22，CoCl26H2O0003，淀粉酶00025，pH70～72，用自来水配制。1.4诱变及筛选方法1.4.1紫外线诱变取制备好的菌悬液5ml移入直径为90mm的无菌培养皿中，放入无菌磁力搅拌棒，置于磁力搅拌器上，功率20et)诱变将不含甲硫氨酸的斜面培养基20ml倒入培养皿中，待凝固后倒入10ml含有不同浓度的Met斜面培养基，终浓度分

8、别为025、050、10mg/ml。处理后的孢子悬液稀释后涂布于平板上，28℃倒置培养7～9d［3］，挑取优势单菌落转接于