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时间:2019-03-12
《探析高产海藻糖菌株的诱变育种、培养基优化及提取纯化的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、河北工业大学硕士学位论文高产海藻糖菌株的诱变育种、培养基优化及提取纯化的研究姓名:张丽杰申请学位级别:硕士专业:化学工艺指导教师:邸进申20040101}IlJ北1。业人学硕}‘学位论义高产海藻糖菌株的诱变育种、培养基优化及提取纯化的研究摘要海藻糖是一种非还原性双糖,其独特的保护功能能使生物大分子(如蛋白质、核酸等)在外界高温、脱水等恶劣环境下免受伤害,近几年成为中外科学家研究的热点。本文以安琪活性干酵母复壮后的鲜酵母为出发菌株,在确定测定方法和摇瓶培养观察的自H提下,分别对其进行紫外、化学和微波诱变。在紫外诱变过程中,对出发菌株共进行了一.轮紫外
2、诱变,照射时间是40秒~60秒,每轮照射后,从15株菌中筛选正突变高的菌株进行下一轮的诱变。在进行的第三轮诱变时筛选到一株高产菌株,其海藻糖的产量为19.529/lOOg干酵母。化学诱变联合使用了两种低毒性诱变剂,两种诱变剂的最佳配比是:5一溴尿嘧啶300um01几和盐酸平阳霉素5umol/L,诱变菌株中最高海藻糖产量为15989/lOOgr酵母。经微波诱变后获得的高产菌株海藻糖的产量为17.0lg/]OOg干酵母。小文在诱变的同时对酵母菌的操作条件和培养基也进行了优化,在找到海藻糖发酵体系操作最佳条件即最适摇床转速为240r/min、最适温度为3
3、5℃的前提下,对培养基中的碳源浓度、氮源浓度、氮碳比、无机盐和微量元素的组成和含量也进行了探讨,从而找出最优培养基配方。对从活性干酵母中提取海藻糖的工艺进行了研究。作者用蒸馏水从活性干酵母中提取海藻糖的最佳条件是:温度80℃、料液比l:20(干酵母的质量和提取剂的体积比,g/m1),提取1个小时,海藻糖的产量是16.329海藻糖/1009干酵母,pH值对提取率没有影响。并比较了不同提取剂对海藻糖提取的影响,其中用1%的氧化钙溶液提取,产量可达21.549海藻糖/lOOg干酵母。在研究从啤酒废酵母中提取海藻糖的工艺时,对啤酒废酵母进行了特殊的处理,即
4、把废酵f寸在烘箱中烘干一定H,J间后,用粉碎机制成废酵母粉。并比较了传统提取方法(用冷凝叫流装蹬提取)和索式提取法的产量。实验表明,用索式提取海藻糖的产量约是传统提取产量的3倍,提取工艺为:料液比3:50(废酵母粉的质量和提取剂的体积比,g/m1),恒温水浴温度为80。C,真空度0.09Mpa下,提取--+时,产量为6.5059海藻糖/kg干废酵母,而所测啤酒废酵母中海藻糖的总含量是7.989海藻糖/kg干废酵母。研究了提取液的纯化、精制及结晶工艺。用碱金属除蛋白、活性炭脱色、离子交换捌脂除杂离子和进一‘步脱色。离子交换树脂采用001X7型阳离子交
5、换树脂和201×7型阴离予交换树脂组成的混合床,阴阳离子交换树脂的体积比为2:1。精制后的提取液浓缩到质量百分数为15%左右,用4倍体积的无水乙醇结晶一周,可得柱状晶体,结晶得率为80%.关键词:海藻糖,酵母菌,紫外诱变,化学诱变,微波诱变,提取,纯化,结晶苎兰塑苎堡堕堡竺煎壅童些:量童量垡垡垒丝坠!!些竺竺塞STUDYONSCREEN0FYEASTSTRAINWITHHIGHTREHALOSEYIELDS、oPTIMIZATIoNoFCULTUREMEDIUM、EXTRACTIoNANDPURIFICATIoNABSTRACTTrehalosei
6、Sanonreducingdisaccharideofglucose.IthasanexcellentabilitytOprotectbiologicalcells(suchasprotein,nucleicacid,etc)fromdamagecausedbydryinganddehydration.SOithasbeenthestudingfclCUSforscientistsintherecentyears.InthispapertakingAnQiactivefleshyeastafterrejuvenationasstartingstra
7、ins,mutationwasobtainedbyUV、chemicalreagentsandmicrowaveheatingonthebaseofmakingsurethemeasuringmethodandobservationoffermentationculture.DuringUVmutafionprocess,therewerethreeturnsofUV-mutationonthestartingstrainsinallandthemutationtimewas40~60seconds.Atieronerumofmutation,st
8、rainswithhighmutationratiowereselectedfromfifteenstrainstOrec
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