探析高产海藻糖菌株的诱变育种、培养基优化及提取纯化的研究

《探析高产海藻糖菌株的诱变育种、培养基优化及提取纯化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北工业大学硕士学位论文高产海藻糖菌株的诱变育种、培养基优化及提取纯化的研究姓名：张丽杰申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：邸进申20040101}IlJ北1。业人学硕}‘学位论义高产海藻糖菌株的诱变育种、培养基优化及提取纯化的研究摘要海藻糖是一种非还原性双糖，其独特的保护功能能使生物大分子(如蛋白质、核酸等)在外界高温、脱水等恶劣环境下免受伤害，近几年成为中外科学家研究的热点。本文以安琪活性干酵母复壮后的鲜酵母为出发菌株，在确定测定方法和摇瓶培养观察的自H提下，分别对其进行紫外、化学和微波诱变。在紫外诱变过程中，对出发菌株共进行了一．轮紫外

2、诱变，照射时间是40秒～60秒，每轮照射后，从15株菌中筛选正突变高的菌株进行下一轮的诱变。在进行的第三轮诱变时筛选到一株高产菌株，其海藻糖的产量为19．529／lOOg干酵母。化学诱变联合使用了两种低毒性诱变剂，两种诱变剂的最佳配比是：5一溴尿嘧啶300um01几和盐酸平阳霉素5umol／L，诱变菌株中最高海藻糖产量为15989／lOOgr酵母。经微波诱变后获得的高产菌株海藻糖的产量为17．0lg／]OOg干酵母。小文在诱变的同时对酵母菌的操作条件和培养基也进行了优化，在找到海藻糖发酵体系操作最佳条件即最适摇床转速为240r／min、最适温度为3

3、5℃的前提下，对培养基中的碳源浓度、氮源浓度、氮碳比、无机盐和微量元素的组成和含量也进行了探讨，从而找出最优培养基配方。对从活性干酵母中提取海藻糖的工艺进行了研究。作者用蒸馏水从活性干酵母中提取海藻糖的最佳条件是：温度80℃、料液比l：20(干酵母的质量和提取剂的体积比，g／m1)，提取1个小时，海藻糖的产量是16．329海藻糖／1009干酵母，pH值对提取率没有影响。并比较了不同提取剂对海藻糖提取的影响，其中用1％的氧化钙溶液提取，产量可达21．549海藻糖／lOOg干酵母。在研究从啤酒废酵母中提取海藻糖的工艺时，对啤酒废酵母进行了特殊的处理，即

4、把废酵f寸在烘箱中烘干一定H,J间后，用粉碎机制成废酵母粉。并比较了传统提取方法(用冷凝叫流装蹬提取)和索式提取法的产量。实验表明，用索式提取海藻糖的产量约是传统提取产量的3倍，提取工艺为：料液比3：50(废酵母粉的质量和提取剂的体积比，g／m1)，恒温水浴温度为80。C，真空度0．09Mpa下，提取--+时，产量为6．5059海藻糖／kg干废酵母，而所测啤酒废酵母中海藻糖的总含量是7．989海藻糖／kg干废酵母。研究了提取液的纯化、精制及结晶工艺。用碱金属除蛋白、活性炭脱色、离子交换捌脂除杂离子和进一‘步脱色。离子交换树脂采用001X7型阳离子交

5、换树脂和201×7型阴离予交换树脂组成的混合床，阴阳离子交换树脂的体积比为2：1。精制后的提取液浓缩到质量百分数为15％左右，用4倍体积的无水乙醇结晶一周，可得柱状晶体，结晶得率为80％．关键词：海藻糖，酵母菌，紫外诱变，化学诱变，微波诱变，提取，纯化，结晶苎兰塑苎堡堕堡竺煎壅童些：量童量垡垡垒丝坠!!些竺竺塞STUDYONSCREEN0FYEASTSTRAINWITHHIGHTREHALOSEYIELDS、oPTIMIZATIoNoFCULTUREMEDIUM、EXTRACTIoNANDPURIFICATIoNABSTRACTTrehalosei

6、Sanonreducingdisaccharideofglucose．IthasanexcellentabilitytOprotectbiologicalcells(suchasprotein，nucleicacid，etc)fromdamagecausedbydryinganddehydration．SOithasbeenthestudingfclCUSforscientistsintherecentyears．InthispapertakingAnQiactivefleshyeastafterrejuvenationasstartingstra

7、ins，mutationwasobtainedbyUV、chemicalreagentsandmicrowaveheatingonthebaseofmakingsurethemeasuringmethodandobservationoffermentationculture．DuringUVmutafionprocess，therewerethreeturnsofUV-mutationonthestartingstrainsinallandthemutationtimewas40～60seconds．Atieronerumofmutation，st

8、rainswithhighmutationratiowereselectedfromfifteenstrainstOrec