益气活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响

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1、益气活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响作者：黎志萍，赵伟康，徐品初，陈方敏，金国琴，姚明忠【关键词】肝细胞［摘要］目的：观察益气、活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响。方法：以自然衰老大鼠为衰老模型，采用RTPCR、ethods:Arecipeforreplenishingqiandarecipeforactivatingbloodinisteredtoagingratsrespectively,andtheeffectsoftheaboverecipesontheexpressionsofsenescencerelatedgenes

2、(p16,p21,PA,cyclinD1andcyclinE)inedbyRTPCRandethods.Results:Theexpressionsofp16,p21andcyclinD1mRNAsandprotEinsintheliveroftheuntreatedagingratsRNAsandprotEInsdecreased.AsparedRNAandproteinandupregulatetheexpressionsofcyclinEmRNAandprotein,buthadnoobviouseffectsontheexpressionsof

3、mRNAsandproteinsofp16,p21andPA.Conclusion:RecipesforreplenishingqiandactivatingbloodcanimprovethelivercellproliferationofagingratsviadoRNAandproteinandupregulatingtheexpressionsofcyclinEmRNAandprotein.　　KEYyc、cfos、cjunmRNA的表达，下调p53mRNA的表达［5］。本实验从细胞增殖调控角度，根据中医理论，从益气活血的抗衰经典方中分别选择几

4、味有代表性的中药组成小复方，以自然衰老大鼠为衰老模型，应用RTPCR和Westernblotting法研究益气、活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因p16、p21、cyclinD1、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PA)和cyclinE表达的影响。　　1材料与方法　　1.1实验中药益气方选用党参、黄芪、炙甘草（取自《时氏医道》保元汤），活血方选用川芎、当归、赤芍（取自经方四物汤）。中药制剂采用水提醇沉法制备后，分装于消毒好的塑料瓶中，于－20℃保存。　　1.2实验动物SD雄性大鼠（上海中医药大学实验动物中心

5、提供）24只，分成青年对照组（5月龄）、老年对照组（22月龄）、老年益气组（22月龄）和老年活血组（22月龄）。老年益气组和活血组的用药剂量为临床成人剂量的20倍（按每千克体质量的用药量进行换算），采用饮料方式给药，每周服药5d，停药2d，自18～22月龄连续给药4个月。　　1.3RTPCR肝组织细胞总的RNA按Trizol一步法提取，具体步骤按试剂说明书操作。βactinPCR引物［6］：5’CCAGCCATGTACGTTGCTATCCAG3’，5’GGAACCGCTCATTGCCAATGGTGA3’，扩增片段为378bp；p16PCR引物：5’AT

6、GGAGTCCTCTGCAGATAG3’，5’TTAGCGCTGCTTTGGGGGTT3’，扩增片段为480bp；p21PCR引物：5’ATGTCCGATCCTGGTGATGT3’，5’GGGCTTTCTCTTGCAGAAGA3’，扩增片段为495bp；cyclinD1PCR引物：5’ATGGAACACCAGCTCCTGTG3’，5’TGGTGTTCCATGTCGGTGG3’，扩增片段为888bp；PAPCR引物：5’ATGTTTGAGGCACGCCTGAT3’，5’AGATCCTTCTTCATCTTCGA3’，扩增片段为786bp；cyclinEPC

7、R引物：5’AAAGAAGAAGGTGGTTCCGA3’，5’TCATTCTGTCTCCTGCTCAC3’，扩增片段为1191bp。PCR扩增反应总体积为50μl。扩增程序为：95℃（30s）→［变性94℃（30s）→退火55℃(30s)→延伸72℃(30s)］×30个循环→72℃（7min）→4℃贮存。根据目的片段的长短及引物的Tm值设置退火温度及延伸时间。PCR产物鉴定电泳，紫外灯下观察，图像分析系统扫描。　　1.4SF)和40μl混合蛋白酶抑制plete液(pleteEDTAfreeproteaseinhibitorcocktailtablet,

8、1片加1ml水），4℃10000r/min离心10min，取上清液于－70℃冷冻保存。24h后