化痰活血方对高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体基因表达的影响

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1、化痰活血方对高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体基因表达的影响作者：叶勇梅国强刘松林石拓雍雪莲张茂林梅杰【关键词】高脂血症；,,低密度脂蛋白；,,受体；,,化痰活血方　　摘要：目的观察化痰活血方对高脂血症大鼠低密度脂蛋白受体基因表达的影响，从分子水平探讨该方的降脂作用机理。方法采用高脂乳剂建立大鼠高脂血症模型后给予化痰活血方，应用逆转录―聚合酶链反应（RTPCR）法测定大鼠肝低密度脂蛋白受体（LDLRmRNA）水平。结果化痰活血方能显著增加高脂血症大鼠肝脏LDLRmRNA的表达，与模型组比较有显著性差异（P<0.05或P＜0.01）；结论化痰活血方降

2、脂作用机理可能是通过提高高脂血症大鼠低密度脂蛋白受体基因的表达，从而起到降脂作用。　　关键词：高脂血症；低密度脂蛋白；受体；化痰活血方　　TheEffectofHuatanHuoxueFangonHepaticLoiaRats　　Abstract：ObjectiveToexplorethemolecularmechanismofHuatanHuoxueFanginpreventiononlipidmetabolismdisordersinhyperlipidemiarats.MethodsFedtheratsiaemulsiontoestablisht

3、hehyperlipidemiamodel,thenappliedHuatanHuoxuePrescription.ThelevelsofliverLDLRmRNAeasuredbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).ResultsTheresultsofRTPCRshoRNAlevels,themodelgroup（P<0.05orP＜0.01）.ConclusionHuatanHuoxueFangmaypreventlipidmetabolismdisordersthrough

4、upregulationofLDLRtranscriptionlevel.　　Keyia;Lol浓度的药液；力平脂（法国利博福尼制药公司，批号为69660），使用前用生理盐水配成1.8mg/ml混悬液。胆固醇、胆酸钠（美国Sigma公司）；甲基硫氧密啶（北京市燕京制药厂），丙二醇、吐温80（湖北医药公司化学试剂分公司）；TRIzolReagentTotalRNA试剂盒（美国Invitrogen公司）；PCR试剂盒（宝生生物有限公司）；LDLR（5'AACTAGACTGCTCCCCCAAGAC3'；5'CTGCGATGGATACACTCACTACTG3'

5、）；内参照GAPDH由北京奥科生物技术有限公司合成。　　1.1.3主要实验仪器Primus96PlusPCR仪（德国Ml/（kg・d1）灌胃，1次/d，灌服30d。　　1.2.2给药方法及标本处理大鼠造模的第11天各组分别给予相应药物灌胃。给药剂量按药理实验方法学［3］计算，化痰活血方大、中、小剂量组分别按20.16，10.08，5.04g/kg的标准灌服；力平脂组按0.018g/kg的标准灌服，空白组及模型组以10ml/kg的标准灌服生理盐水。1次/d，连续20d。第21天起，末次给药前禁食12h，给药1h后，用20％乌拉坦0.5ml/

6、100g体重麻醉，切开腹部迅速取肝脏，液氮冻存。　　1.2.3LDLRmRNA的检测将冻存的肝组织剪碎，采用Trizol常规一步法提取总RNA，然后测定RNA样品含量及纯度：A260/A280=1.8～2.0，说明其纯度满足分子生物学实验的要求。RTPCR法分别扩增LDL-R及GAPDHmRNA，取10μlPCR反应产物，在2%琼脂糖凝胶（含0.5mg/L溴化乙锭）中电泳，以DL2000为分子量标准，电泳缓冲液为1×TAE，电泳完毕后，在凝胶自动成像仪上进行照像、数据分析。经凝胶密度扫描系统处理，测定各电泳带灰度值。待测基因mRNA相对表达量以其扩增带

7、吸光度值与相应内参照扩增带吸光度值的比值表示。LDLRmRNA相对量=LDLR电泳带灰度值/GAPDH电泳带灰度值。　　1.2.4统计学处理用SPSS10.0统计软件进行统计，数据以均数±标准差（±ｓ）表示，t检验，以P＜0.05为有统计学意义。　　2结果　　化痰活血方对高脂血症大鼠肝脏LDLRmRNA表达的影响：RTPCR后，琼脂糖凝胶电泳在340bp处显示出LDLR阳性电泳带，在309bp处显示出GAPDH电泳带（图1）。从表1可见，模型组大鼠肝脏LDLRmRNA的表达显著降低，与空白组比较有显著性差异（P＜0.01）。化痰活血方各剂量组及力平脂组

8、LDLRmRNA的表达均显著升高，与模型组比较有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。其中