限食对老龄大鼠抗衰老效应的影响

《限食对老龄大鼠抗衰老效应的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、限食对老龄大鼠抗衰老效应的影响【摘要】目的研究限食对老龄大鼠抗衰老的生物效应，并探讨其可能机制。方法11月龄SD大鼠68只，雌雄各半，随机分为3组，分别给予实验组大鼠按对照组食量的80%和60%，6个月后测量血清超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,白介素2（IL2）,脑组织单胺氧化酶（MAO）及肝细胞凋亡指数。结果实验组大鼠血清SOD活性,IL2含量较对照组明显提高(P<0.05)；血清MDA水平，脑组织MAO活性，肝细胞凋亡指数较对照组显著降低(P<0.01)。结论自老龄期开始限食，具有抗衰老的生物学效应。【关键词】膳食限制；衰老；肝

2、细胞凋亡；生物学效应　膳食限制（dietaryrestriction，DR），即在满足机体对各种营养素需要量的前提下，适当限制食物的摄入，能明显延缓衰老的速度，延长实验动物的寿命。许多实验不断证实，啮齿类动物从幼年开始，每天限制正常摄食量的10%～30%，不但不会引起营养不良，还可以比正常摄食组延长10%～30%的平均和最高寿命。从成年开始限食，可以延长小鼠的最高寿限10%～20%〔1〕。对于老龄期动物的限食研究却较少有报道。本研究采用老龄期大鼠开始限食，探讨其机体内若干生物学效应的改变及可能机制，为抗衰老的研究提供新的实验依据。　　1材料与方法　　1.1分组　

3、　本实验采用清洁级SD大鼠，10～11月龄，由中山大学实验动物中心提供。将68只大鼠随机分为三组。对照组，自由摄食，20只，雌雄各半；限食20％组，食量摄入为对照组的80%，24只，雌雄各半；限食40％组，食量摄入为对照组的60%，24只，雌雄各半；单笼饲养6个月，至16～17月龄。动物饲养6个月后经股动脉放血处死。低温分离血清，-20℃保存，大鼠处死后在75%乙醇中浸泡3～5min,无菌环境中取出脑组织、肝脏组织等，称重后迅速置于液氮中，后移入－80℃冰箱保存备用。　　1.2动物饲料　　本实验以食物配方饲料作为动物基础饲料。每天称量对照组动物实际饲料摄入克数，

4、并以此计算第2天实验组动物的饲料用量，调整实验组饲料中维生素和无机盐的百分含量，保证各组动物除食量摄入差异外，无机盐和维生素等微量营养素每天摄入的克数均一致。见表1。表1大鼠食物饲料配方(略)　　1.3试剂　　超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，丙二醛(MDA)测定试剂盒，白介素2(IL2)检测试剂盒〔晶美生物工程（深圳）有限公司〕，单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒（南京建成生物工程研究所提供）；TritonX100(上海生物工程有限公司)；DAB显色试剂盒，Mayor苏木素（福州迈新生物技术开发有限公司）；细胞凋亡原位检测试剂盒（德国罗氏公司）。　　1.4

5、指标测定　　测定血清SOD,MDA,IL2；取大鼠脑组织块约0.3g，加冷生理盐水制备成10%的组织匀浆，2500r/min，离心10min。再取组织匀浆上清液加生理盐水稀释成1%组织匀浆，测定单胺氧化酶B(MAOB)。　　1.5细胞凋亡检测　　取适量冷冻的肝组织，用OCT包埋，制成6μm厚的冰冻切片，丙酮固定20min,凋亡检测采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）。结果判断：在光学显微镜400倍视野下，每张切片随机选择5个阳性视野，每个视野计数200个肝组织细胞中的阳性细胞核数，以平均计算阳性细胞所占百分比，求其均数值作为

6、凋亡细胞阳性指数(AI）。　　1.6统计学分析　　采用SPSS13.0软件包建立数据库，并进行统计分析。所有资料均先进行正态性检验。多组间均数比较采用单因素方差分析；各组间的两两比较采用LSD法。　　2结果　　2.1动物的一般情况　　实验组大鼠在初期烦躁不安，毛蓬乱少光泽，随后逐渐正常。实验组大鼠明显活泼好动，反应灵敏，对照组大鼠则显得迟钝少动，反应缓慢，缺少灵敏性。在实验期间，实验组大鼠由于限食，与初始体重比较，终末体重有不同程度的下降（P<0.05），而对照组大鼠体重明显增加，因此对照组和实验组大鼠最终体重有显著差异（P<0.01）。见表2。表2

7、各组大鼠初始和终末期体重变化比较(略)　　2.2不同组大鼠血清SOD和MDA水平变化　　雌性大鼠各组SOD活性比较显示，限食40％和限食20％组SOD活性显著高于对照组,有统计学意义(P<0.05）；各组血清MDA含量比较显示，限食40％组和限食20％组均显著低于对照组(P<0.01，P<0.05)，且限食20％和限食40％组间血清SOD活性和MDA含量的差异亦有统计学意义（P<0.01）。　　雄性大鼠各组SOD活性比较显示，限食40％组SOD活性显著高于对照组（P<0.01），限食20％组SOD活性也明显高于对照组，有统计学意义（

8、P<0.05），限