川芎嗪对血管紧张素ⅱ诱导血管平滑肌细胞表达血小板源生长因子的影响论文

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1、川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞表达血小板源生长因子的影响论文孙银平，郭勇，王省，张大伟，王煜霞【摘要】目的探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)中血小板源生长因子（PDGF）表达的影响。方法培养大鼠主动脉VSMC，以10-7mol/LAngⅡ刺激作为AngⅡ组，AngⅡ刺激前分别应用不同浓度川芎嗪预处理做为高、中、低剂量组，以正常的VSMC为对照组.freelinalcoronaryangioplasty,PTCA）后再狭窄一直是冠心病治疗领域的一大难题，血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell，VSMC)

2、异常增殖是PTCA术后再狭窄的一个重要病理改变［1］。有文献报道，血管紧张素II(angiotensinII,AngⅡ)、血小板源生长因子（platelet-derivedgroethylpyrazine,TMP)对其影响，探讨TMP对VSMC增殖的作用机制。1材料与方法1.1动物及试剂体重120～150g的健康雄性SD大鼠（河南省实验动物中心）。盐酸川芎嗪注射液（无锡市第七制药公司），DMEM培养基干粉（Sigma）、细胞培养器材、胎牛血清、胰蛋白酶购自华美生物工程公司；AngⅡ（Merck公司），PDGF-B抗体（博士德），sm-actin免疫试剂盒（Santa

3、Cruz），其它试剂为分析纯产品。1.2细胞培养与鉴定将大鼠断头处死，无菌条件下迅速打开胸腔，取出胸主动脉，按组织贴块法在细胞培养箱内以含20%胎牛血清的DMEM培养。光镜下以及倒置相差显微镜下观察细胞呈梭形，生长至融合状态时呈现特有的峰与谷特点，同时经sm-actin免疫细胞化学染色鉴定，细胞纯度达95%以上。选择4-6代VSMC进行实验。1.3实验分组①对照组(control)：不加特殊试剂，仅给予无血清DMEM培养；②AngII组：AngII10-7mol/L培养；③TMP低剂量组：20mg/LTMP预孵育30min后，加AngⅡ培养；④TMP中剂量组：200

4、mg/LTMP预孵育30min，加AngⅡ培养；⑤TMP高剂量组：2000mg/LTMP预孵育30min，加AngⅡ培养。1.4检测细胞增殖活度采用MTT法。按上述方法接种于96孔培养板中培养48h后终止，换无血清DMEM培养24h，分组（同前）继续培养24h，每孔加入MTT溶液20μl，吸去培养上清液，每孔加入150μl二甲基亚砜振荡；选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔吸光度值（A值）。1.5免疫细胞化学法检测PDGF-B的表达0.25%胰蛋白酶消化制备细胞悬液，调整细胞密度为5×104/L，接种于内置有盖玻片的6孔培养板中培养48h，无血清DMEM培养24h

5、，分组（同前）继续培养24h。培养细胞爬片用PBS冲洗3次，4%多聚甲醛固定15min，0.3%过氧化氢中孵育10min；滴加复合消化液后滴加封闭血清，37℃，30min，滴加PDGF-B一抗（1∶200），4℃过夜，滴加二抗工作液，37℃孵育30min；滴加SABC，37℃孵育30min。DAB显色，中性树胶封片。1.6计算机图像分析每一张涂片400倍显微镜下随机选择5个视野，计算其平均灰度值，数值越大表示抗原表达量越小。1.7统计学处理数据用±s表示计算机统计软件分析SPSS11.0，采用One-aformationinarabbitiliacarteryinj

6、urymodel［J］.CardiovascRes,2006,72(3)：483.［2］罗德生，郑红花，李映红，等.川芎嗪抗血管紧张素Ⅱ诱导的离体培养血管平滑肌细胞增殖的实验研究［J］.时珍国医国药，2006，17（3）：321.［3］KimTJ,YunYP.AntiproliferativeactivityofNQ304,asynthetic1,4-naphthoquinone,.freelediatedviathepressionsofthePI3K/AktandERK1/2signalingpathulatedvascularsmoothmusclecells

7、［J］.Vasculpharmacol,2007,46(1)：43.［4］梁爱群.川芎嗪的药理及机理研究［J］.时珍国医国药，2005，16（6）：532.［5］孙银平，王省，张大伟，等.川芎嗪对大鼠颈总动脉损伤后ET、AngⅡ与血小板源生长因子表达的影响［J］.时珍国医国药,2009,20（2）：277.［6］LeeS,LimHJ,ParkHY,etal.Berberineinhibitsratvascularsmoothmusclecellproliferationandmigrationinvitroandimprovesneointimaformatio