沙门氏菌对种鸽生产性能的影响

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1、第二章本课题的研究目的和意义沙门氏菌对动物健康及畜牧业生产影响之大不言而喻，但其对种鸽生产性能是 否有显著的影响或者是影响到底有多大，仍然没有详细报道。本研究希望能建立起鸽鼠伤寒沙门氏菌简单而又较准确科学的血清诊断方法，进而通过筛选出具有代表 性和研究价值的沙门氏菌阳性感染种鸽为样本，研究沙门氏菌在种鸽中的感染率情况.对感染沙门氏菌种鸽的生产性能各因素进行分析，包括产蛋周期、受精率、死胚 率、孵化率、幼鸽死亡率以及种鸽的平均生产率，作为期一年的生产状况跟踪调查分析，再同对照组进行比较，进而获得其对种鸽生产性能影响的依据

2、，以更加有效 指导我们在种鸽沙门氏菌病方面的防治工作。3第三章材料3.1实验动物试验种鸽为上海市跃进鸽场存栏种鸽。根据试验需要筛选出具有代表性的阳性 感染种鸽和阴性种鸽。3.2材料和设备A：营养肉汤培养基、普通琼脂、沙门氏菌和志贺氏（SS）琼脂培养基、还原剂（硫 代硫酸钠，吐温80）、0.3%—0.4%福尔马林溶液、生化鉴定糖管、SPF鸡胚、试验小 白鼠，B:沙门氏菌属诊断血清（宁波天润生物药业有限公司、北京中海动物保健科技有限公司）、C:培养箱、冰箱、酒精灯、记号笔、离心机;等。4第四章方法和步骤3.1分离鸽鼠伤寒沙

3、门氏菌4.1.1分离病原无菌取病鸽脑、肝、肺、肾,把以上病料磨碎,用青链霉素作用2小时,离心取上 清接种9日龄SPF鸡胚。肝脏、肺、肾剪开内切面涂血平板。4.1.2纯化病原脑组织接种的SPF鸡胚在接种后12小时,24小时,48小时,72小时,96小时…… 观察,均未见死亡。挑血平板上单个菌落做纯化培养。3.2对分离得到的沙门氏菌进行鉴定4.2.1培养特点对分离得到的17株沙门氏菌（崇明株、宝山株、浦东株）经培养观察都有下列特点：琼脂培养基培养小时后为圆形、隆起、光滑、半透明无色菌落,直径2-3毫米。S-S培养基:为无色

4、菌落,培养24小时后菌落中央稍微灰黑,长时间则变深黑色且扩大。亮绿一胆盐一四硫磺酸钠肉汤能生长。三糖铁斜面培养基:穿刺和划线接种,斜面上呈红色,基底为黑色且产气。半固体培养基沿穿刺线向四周扩散生长。普通肉汤呈一致混浊,液面有微薄菌膜,制成压滴标本暗视野观察为小杆菌,有运动性。4.2.2生化特性分离纯化得到的病原菌对葡萄糖、麦芽搪、果糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇、 卫矛醇和伯胶糖发酵产气（其中伯胶糖要经2-3周培养才发酵完全）。不发酵蔗糖、乳糖、水杨酸和侧金盏花醇。产生硫化氢。M.R阳性,V.P阴性,吲哚阴性,尿素酶阴性,

5、赖氨酸脱梭基酶阳性,还原硝酸盐,枸橼酸盐阳性。4.2.3抗原结构取沙门氏菌抗O单因子血清和抗H单因子血清作凝集试验,测定17株菌抗原结构皆为4,5:i:2。即O抗原:4,5;H抗原:第1相i,第2相2。符合鼠伤寒沙门氏菌抗原结构。(注:所用的57和144种沙门氏菌因子血清中因缺O之1和12以及H2相之1,故未能反映出菌株在这些方面的抗原结构,虽然如此,仍不至于影响判断。)53.1动物感染试验小白鼠接种：取“崇明株”和“宝山株”的20小时肉汤培养物分别皮下接种20 克小白鼠各3只,0.2毫升每只,皆于第3-5天先后发病死

6、亡,并从死亡小白鼠内脏中分离出本菌。童鸽接种：取“崇明株”20小时肉汤培养物复归感染50日龄健康童鸽， 3只作病例复制试验,胸肌注射0.5毫升每只,第3、第4、第8天各死1只,死前有两只下痢,并从死鸽肝中分离出本菌。同居感染试验：取健康童鸽两只与上述感染鸽同 居,第9天1只表现减食、下痢,病后第6天死亡。另1只观察28天未见发病。通过以上试验表明所分离得到的菌株为鼠伤寒沙门氏菌。试验中未分离得到鸡白痢沙门氏菌病原菌株。但在用鸡白痢沙门氏菌标准诊断血清O9对鸽群进行筛查时，则能较准确筛查出鸡白痢沙门氏菌带菌种鸽。4.1.

7、1建立鸽鼠伤寒沙门氏菌血清凝结方法4.2.1鸽鼠伤寒沙门氏菌制备抗原的菌株选择将纯化培养的鸽沙门氏菌的崇明株，浦东株，宝山株，分别接种营养肉汤37℃培养18h，再于普通琼脂平板上划线培养后，每一种菌株选择5个单菌落，分别接种于营养肉汤中，37℃培养24-36h。培养24h后，每4h观察培养物的浊度，并用沙门氏菌标准血清（单因子O4标准血清）对各个鸽沙门氏菌培养物进行凝集试验，选择凝集现象明显的培养物，再划线培养于普通琼脂平板上。4.2.2鸽鼠伤寒沙门氏菌制备抗原菌株的扩大培养观察上述普通琼脂培养物是否有污染菌，如没有污

8、染菌，将平板上的细菌用生理盐水洗下，备用。将上述凝集明显的培养物且再划线培养于普通琼脂平板上没有污染的菌液，取0.5ml各接种含0.1%硫代硫酸钠和吐温80的营养肉汤中，37℃培养24-36h，培养物浊度不再上升为止。4.2.3鸽鼠伤寒沙门氏菌抗原制备将扩大培养的细菌液，按0.3%加入福尔马林灭活，灭活条件：37℃，36h。将灭活