高效液相色谱法与薄层扫描法测定女贞子中齐墩果酸含量的比较论文

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1、高效液相色谱法与薄层扫描法测定女贞子中齐墩果酸含量的比较论文罗朵生，郭姣，何伟，李勇【摘要】目的研究用高效液相色谱测定女贞子中齐墩果酸含量的方法,并与薄层扫描色谱法比较。方法色谱柱为kromasilC18（5μm，250mm×4.6mm）；柱温30℃；流动相甲醇-水（85∶15）；流速0.7ml·min-1；检测波长为204nm。结果齐墩果酸在0.6456～4.304μg范围内线性关系良好，r=0.9999（n=5）,.freelethodforthedeterminationofthecontentofoleanolicacid,andp

2、aretheresultsbyHPLCandTLCS.MethodsAGTLCSCANNER3薄层色谱扫描仪（瑞士CAMAG）；UV-754型分光光度计（上海精密科学仪器公司）；ZF－2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；齐墩果酸（110790－200304购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；女贞子药材（购自广州致信中药饮片有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯，纯净水，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1高效液相色谱法2.1.1对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10.76mg，加甲醇溶解，制成每毫升含0.

3、538mg的溶液，作为对照品溶液。2.1.2供试品溶液的制备取女贞子粗粉约0.5g（批号200510170），精密称定，加乙醇25ml，加热回流30min，放冷，滤过，药渣加乙醇同上重复回流两次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇微热使溶解并转移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。2.1.3最大吸收波长的选择吸取齐墩果酸对照品溶液（0.538mg·ml-1）1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用紫外可见分光光度计，从200～400nm全波长扫描，齐墩果酸最大吸收波长为204nm。见图1。2.1.4色谱条件与系统适用性实验色谱柱为

4、kromasilC18（5μm，250mm×4.6mm）；流动相为甲醇-水（85∶15）；检测波长为204nm；流速0.7ml·min-1；柱温：30℃。自动进样器进样。在此色谱条件下，得色谱图见图2～3。峰形对称，理论板数以齐墩果酸峰计在3000以上。2.1.5线性关系的考察吸取对照品溶液1，2，5，10，15μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积积分值。以齐墩果酸微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，求得直线方程为Y=1006577.61X－58700.91，r=0.9999。线性范围为0.6456～4.304μg。2.1.

5、6精密度实验吸取同一供试品溶液10μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积积分值，连续6次，齐墩果酸峰面积积分值RSD＝0.75％（n=6）。结果表明仪器精密度良好。2.1.7稳定性实验吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积积分值，然后分别在2，4，8，24h再进样测定。结果表明，供试品在24h内稳定性良好，齐墩果酸RSD＝0.39％（n=6）。2.1.8重复性实验取同一批样品（批号20051017），按“2.1.2”项下的方法制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得RSD＝0.75％(n=6)。2.1.9回收率实验精密称取已知

6、含量的供试品（批号20051017）适量（相当于齐墩果酸1.076mg），加入齐墩果酸对照品2ml，依法操作，计算回收率。结果见表1。平均回收率为101.8%，RSD为0.75%。表1加样回收率测定结果（略）2.2薄层扫描色谱法2.2.1色谱条件展开剂为环己烷-丙酮-醋酸乙酯-甲酸（5∶2∶1∶0.1）；显色剂为10%硫酸乙醇溶液；扫描波长λs=530nm，λR=700nm。2.2.2供试品溶液的制备与“2.1.2”项下同。2.2.3对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10.76mg，加甲醇溶解，制成每毫升含1.076mg的溶液，作为对照

7、品溶液。2.2.4线性关系的考察吸取对照品溶液2，4，6，8，10μl点于同一硅胶G薄层板上扫描，按照上述色谱条件测定峰面积积分值。以齐墩果酸微克数为横坐标，以吸收度积分值为纵坐标，计算回归方程Y＝1620.7X＋1280.7，r＝0.9964，线性范围为：2.02～10.1μg。2.3结果分析2.3.1HPLC法取同一批样品（批号：20051017）,按照“2.1.2”项下的供试品制备方法制备供试品溶液4份，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，每份重复测定2次，计算。测定结果见表2。2.3.2TLCS法分别吸取各

8、供试品溶液6μl，对照品溶液6，8μl交叉点于同一薄层板上，按上述方法展开、扫描，测量供试品与对照品吸收度积分值，测定，计算，即得。色谱图见图4，结果见表2。表2高效液相色谱法与