去卵巢大鼠海马及额叶皮层海马胆碱能神经刺激肽含量的变化论文

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1、去卵巢大鼠海马及额叶皮层海马胆碱能神经刺激肽含量的变化论文高飞宋士军胡进中李芳芳张若楠【摘要】目的观察雌激素缺乏对大鼠海马CA1/CA2区及额叶皮层海马胆碱能神经刺激肽（HP）含量的影响。方法选取清洁级4月龄雌性SD大鼠30只，随机分为3组：假手术组（Sham组）、去卵巢组（OVX组）和去卵巢加雌二醇（E2）组（OVX+E2组），每组10只。除Sham组做假性手术外，其余2组均行双侧卵巢切除术；OVX+E2组去卵巢手术10d后给予E2皮下注射，100μg/kg，隔日1次。去卵巢手术后常规喂养4个月，获取组织标本，用于组

2、织蛋白和组织总RNA的提取。用ethodsThirtyfemalecleanSDratsaged4monthslydividedintosham,OVX,OVXandestradiol(OVX+E)groups,andtenratspergroup.Shamgroupeadiposetissueaboveovaries,OVXgroupy.Postoperativeratsethodandthensacrificed4monthslatertoobtaintissuesandspecimenfortheuseofthe

3、extractionoftissues’proteinandtotalRNA.TherelativeproteincontentsofCHPppandNHPppeasuredbyilipore公司）；HPpp氨基末端抗体（NHPppAb）、HPpp羧基末端抗体（CHPppAb）、βactin抗体、免疫印迹发光染料(ECL)（美国SantaCruz公司）；辣根过氧化物酶标记兔抗山羊IgG和辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（北京中杉金桥公司）；β巯基乙醇（美国Promega公司）；TaqDNA聚合酶（美国Fe

4、rmentas公司）；dNTP（北京鼎国生物公司）；反转录试剂盒（美国Fermentas公司）；HPppmRNA、βactin引物（上海生工公司）。其余试剂均为国产优级纯或分析纯。1.3仪器设备DYYⅡ型稳压稳流电泳仪（北京六一仪器厂）；20PR52D型低温高速离心机（日本日立公司）；PTC200型PCR热循环仪（美国MJResearch）；JEDA801E型捷达凝胶成像仪（江苏捷达软件公司）。1.4组织标本的采取及指标测定用戊巴比妥钠(36mg/kg，腹腔注射)麻醉大鼠，剪开头皮，用止血钳沿大鼠头颅中央骨缝撬

5、开，迅速分离脑组织，剥取海马，同时刮除腹侧齿状回和CA3区，剥取额叶皮层，立即将海马背侧组织(CA1/CA2)及额叶皮层置液氮中，于-80℃低温冰箱保存，用于组织蛋白和组织mRNA的提取。分离大鼠子宫并进行称重。1.5组织蛋白的提取取大鼠海马背侧组织及额叶皮层各约50mg，加入预冷的蛋白匀浆液0.5ml，在冰浴中匀浆5min，4℃离心10000r/min离心30min，取上清，Bradford法测定蛋白含量。1.6HPpp蛋白的测定采用_017236）：上游：5′ACTACGGCGGAGTAACGG3′，下游：5

6、′GCTTGGGCACAGAGTCATC3′，长度456bp；βactin（基因文库:NM_031144）：上游：5′GCCATGTACGTAGCCATCCA3′，下游：5′GAACCGCTCATTGCCGATAG3′，长度375bp。HPpp、βactin基因扩增条件均为94℃2min；94℃45s；56℃45s；72℃60s；72℃5min，循环28次。取HPpp和βactinPCR产物各5μl，用2%琼脂糖凝胶进行电泳，将结果用凝胶成像系统照相，分析扩增产物的积分光密度值（I），计算二者的比值（

7、IHPpp/Iβactin），作为HPpp的相对表达量。1.8统计学处理数据以x±s表示，采用SPSS13.0软件进行正态性及方差齐性检验，组间比较用单因素方差分析。2结果2.1大鼠子宫重量与Sham组〔（0.86±0.06）g〕相比，OVX组大鼠子宫重量〔（0.14±0.04）g〕明显降低(P＜0.01)；与OVX组比较，OVX+E2组〔（0.78±0.03）g〕显著升高（P＜0.01）；而Sham组与OVX+E2组无显著差异。2.2大鼠海马HPpp相对含量与Sham组相比，OVX组CHPpp的相对含量明显升高(

8、P＜0.05)；与OVX组比较，OVX+E2组显著降低（P＜0.05）；而Sham组与OVX+E2组之间无显著差异(P＞0.05)。3组间NHPpp相对含量无显著差异，见图1、表1。图1大鼠海马和皮层HPpp相对含量2.3大鼠皮层HPpp相对含量与Sham组相比，OVX组CHPpp的相对含量明显升高(P＜0.05)；与OVX组