高效液相色谱法测定补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量论文

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1、高效液相色谱法测定补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量论文【关键词】补肾益气颗粒；,,补骨脂素；,,异补骨脂素；,,高效液相色谱法摘要：目的建立补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法DiamonsilC18柱（200mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇水（55∶45），流速0.85ml/min，检测波长245nm。结果补骨脂素的线性范围为0.08～0.8μg，r=0.99998(n=6)，平均加样回收率为99.69％，RSD为2.27％;异补骨脂素的线性范围为0.0796～0

2、.796μg，r=0.99998(n=6)，平均加样回收率为100.25％.freelethodforthedeterminationofpsoralenandisopsoraleninBushenyiqigranules.MethodsTheDiamonsilC18（200mm×4.6mm,5μm）obilephaseconsistedofmethanol-lmin-1.TheUVdetective.ResultsThelinearrangeofpsoralenethodcanbeusedtoc

3、ontrolthequalityofBushenyiqigranulesple,reliableandgoodreproducibility.KeyonsilC18（200mm×4.6mm,.freel）；流动相为甲醇水（55∶45）；流速0.85mlmin-1；检测波长245nm。此条件下，补骨脂素和异补骨脂素可达基线分离，分离度大于1.5；理论塔板数大于2000。色谱图见图1~2。2.2线性关系考察分别取补骨脂素和异补骨脂素10mg，精密称定，以甲醇溶解并定容于25ml容量瓶中制成混合对照品溶

4、液（补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为0.400，0.398mgml-1），以此为母液配成补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为0.008，0.016，0.032，0.048，0.064，0.080，0.00796，0.01592，0.03184，0.04776，0.06368，0.0796mgml-1。分别吸取上述对照品溶液10μl，按上述色谱条件进行测定。以峰面积积分值为纵坐标Y，对照品含量为横坐标X（μg），绘制标准曲线，计算回归方程：补骨脂素：Y＝10609X－19.3，r＝0.99998，线性范围为

5、0.08～0.8μg，在此范围内线性关系良好；异补骨脂素：Y＝9793.2X－21.317，r＝0.99998，线性范围为0.0796～0.796μg，在此范围内线性关系良好。图1补骨脂素和异补骨脂素混合对照品色谱图（略）图2样品色谱图（略）2.3供试品溶液的制备取本品适量研匀，称取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，精密称定，密塞，称定重量，超声处理1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.4空白对照实验按本制剂的处方、工艺制成缺补

6、骨脂的阴性制剂，按上述供试品溶液制备方法及测定方法实验，结果表明其他成分对补骨脂素和异补骨脂素的测定无干扰。色谱图见图3。图3空白对照色谱图（略）2.5精密度实验吸取同一混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，结果补骨脂素RSD为0.73%，异补骨脂素RSD为0.59％。2.6重复性实验同一批号的样品，平行取样6份，按供试品溶液的制备方法进行制备，进样10μl，测定，结果补骨脂素平均含量为0.3060mgg-1，RSD为1.40%；异补骨脂素平均含量为0.3071mgg-1，RSD为2.28%。

7、2.7稳定性实验2.7.1对照品精密吸取同一混合对照品溶液10μl，分别于0，24，48h进样，测定峰面积，结果补骨脂素RSD为0.62％，异补骨脂素RSD为0.70％，表明混合对照品溶液在48h内稳定性良好。2.7.2供试品稳定性实验取新鲜配制的供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，10，24h进行测定，结果补骨脂素RSD为2.76%；异补骨脂素RSD为2.31％。表明供试品溶液在24h内基本稳定。2.8加样回收率实验取已知含量的样品6份，分别加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品溶液，按制剂含量测

8、定方法测定含量，计算加样回收率。结果见表1~2。2.9样品含量测定取3批样品，依法测定补骨脂素和异补骨脂素含量。结果见表3。3讨论3.1曾以醋酸乙酯加热回流、索氏提取样品，但所提得的补骨脂素和异补骨脂素均不如甲醇的量多，可能是因为甲醇对样品的穿透力更强的缘故，故选择以甲醇为提取溶剂；考察了甲醇超声提取和回流提取的效果，结果回流提取液杂质较多，在进行HPLC分析时基线较高，不能很好地进行峰面积积分，而超声提取不但操作简便且提取液杂质较少，利于液湘分析，故选择超声提取；在对超声时间的考