高效液相色谱法测定补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量

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1、高效液相色谱法测定补肾益气颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量　　关键词：补肾益气颗粒；补骨脂素；异补骨脂素；高效液相色谱法　　　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofpsoralenandisopsoraleninBushenyiqigranules.MethodsTheDiamonsilC18（200mm×4.6mm,5μm）obilephaseconsistedofmethanol-l・min-1.TheUVdetective.ResultsThelinearrangeofpsoralenethodc

2、anbeusedtocontrolthequalityofBushenyiqigranulesple,reliableandgoodreproducibility.　　KeyonsilC18（200mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇水（55∶45）；流速0.85ml・min-1；检测波长245nm。此条件下，补骨脂素和异补骨脂素可达基线分离，分离度大于1.5；理论塔板数大于2000。色谱图见图1~2。　　2.2线性关系考察分别取补骨脂素和异补骨脂素10mg，精密称定，以甲醇溶解并定容于25ml容量瓶中制成混合对照品溶液（补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为0.400，0.398

3、mg・ml-1），以此为母液配成补骨脂素和异补骨脂素浓度分别为0.008，0.016，0.032，0.048，0.064，0.080，0.00796，0.01592，0.03184，0.04776，0.06368，0.0796mg・ml-1。分别吸取上述对照品溶液10μl，按上述色谱条件进行测定。以峰面积积分值为纵坐标Y，对照品含量为横坐标X（μg），绘制标准曲线，计算回归方程：补骨脂素：Y＝10609X－19.3，r＝0.99998，线性范围为0.08～0.8μg，在此范围内线性关系良好；异补骨脂素：Y＝9793.2X－21.317，r＝0.99998，线性范围

4、为0.0796～0.796μg，在此范围内线性关系良好。　　图1补骨脂素和异补骨脂素混合对照品色谱图（略）　　图2样品色谱图（略）　　2.3供试品溶液的制备取本品适量研匀，称取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，精密称定，密塞，称定重量，超声处理1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。　　2.4空白对照实验按本制剂的处方、工艺制成缺补骨脂的阴性制剂，按上述供试品溶液制备方法及测定方法实验，结果表明其他成分对补骨脂素和异补骨脂素的测定无干扰。色谱图见图3。　　图3空白对照色谱图（略）　　2.5精密度实验吸取同一混合对照品溶液，连续进

5、样6次，测定峰面积，结果补骨脂素RSD为0.73%，异补骨脂素RSD为0.59％。　　2.6重复性实验同一批号的样品，平行取样6份，按供试品溶液的制备方法进行制备，进样10μl，测定，结果补骨脂素平均含量为0.3060mg・g-1，RSD为1.40%；异补骨脂素平均含量为0.3071mg・g-1，RSD为2.28%。　　2.8加样回收率实验取已知含量的样品6份，分别加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品溶液，按制剂含量测定方法测定含量，计算加样回收率。结果见表1~2。　　2.9样品含量测定取3批样品，依法测定补骨脂素和异补骨脂素含量。结果见表3。　　3讨论　　3.1曾

6、以醋酸乙酯加热回流、索氏提取样品，但所提得的补骨脂素和异补骨脂素均不如甲醇的量多，可能是因为甲醇对样品的穿透力更强的缘故，故选择以甲醇为提取溶剂；考察了甲醇超声提取和回流提取的效果，结果回流提取液杂质较多，在进行HPLC分析时基线较高，不能很好地进行峰面积积分，而超声提取不但操作简便且提取液杂质较少，利于液湘分析，故选择超声提取；在对超声时间的考察中发现，超声1h即可将样品中的补骨脂素和异补骨脂素提取得较为完全，因此，确定样品的处理方法为甲醇超声1h。　　表1补骨脂素加样回收率实验结果（略）　　表2异补骨脂素加样回收率实验结果（略）　　结果表明本方法回收率较好。　　表3样品测定结果（略）　　

7、3.2曾考察过甲醇乙腈水的流动相系统，结果发现其稳定性不如甲醇水系统。在不同流动相配比、不同流速的实验中发现，流动相中甲醇所占份额越高，补骨脂素和异补骨脂素的保留时间越短，分离度越小，且流速对其分离度影响亦较大。经反复摸索，最终确定甲醇水（55∶45）为流动相，流速控制在0.85ml・min-1，柱温控制在25℃，补骨脂素和异补骨脂素即可得到良好分离且重现性较好。　　3.3补骨脂素和异补骨脂素的