高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的

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1、高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的【关键词】补骨脂素；,,异补骨脂素；,,补肾酒；,,高效液相色谱法　　摘要：目的：建立补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相法，选用ZorbaxSB－C18分析柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇－0.01%磷酸(40∶60)；检测波长246nm；柱温40℃。结果：补骨脂素在0.0469～0.2331μg范围内线性良好，r＝0.9999；异补骨脂素均在0.0466～0.2328μg范围内有较好的线性关系，r＝0.9999；补骨脂素加

2、样回收率平均为98.44%，RSD为1.19%(n＝5)；异补骨脂素平均回收率为99.70%，RSD为1.99%。结论：该法简便，快速，可用于补肾酒的质量控制。　　关键词：补骨脂素；异补骨脂素；补肾酒；高效液相色谱法　　DeterminationofPsoralenandIsopsoraleninBushenethods:TheZorbaxSB－C18obilephaseconsistedofmethanol－0.01%phosphaticacid(40∶60)anddetective.Results:Thecali

3、brationcurvesofpsoralenandisopsoralenethodisreliableandaccurate,themethodcanbeappliedtoseparateanddeterminetheBushen×4.60mm，5μm)；流动相甲醇0.01%磷酸(40∶60)；柱温为40℃；检测波长246nm；流速1.0ml/min。　　2.2供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10ml，浓缩至约4ml，加水10ml，混匀，用乙醚振摇提取4次(20,15,15,15ml)，合并乙醚液，挥干，残渣

4、加甲醇适量使溶解，并定量转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，通过已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，2g，内径1.0cm)上，收集药液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。　　2.3对照品溶液的制备精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇溶解，制成每毫升中含补骨脂素、异补骨脂素各10μg的溶液，即得。　　2.4空白实验按处方中药味的比例，自配不含补骨脂的群药，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液与补骨脂素与异补骨脂素对照相同保留时间处未显色谱峰，认为无干扰

5、(见图1)。　　2.5线性关系考察分别精密量取补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.1171mg/ml)、异补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.1164mg/ml)各1，2，3，4，5ml，分别置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以补骨脂素、异补骨脂素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明补骨脂素在0.0469～0.2331μg范围内线性良好，其回归方程为Y＝74768.04X100.40，r＝0.9999，异补骨脂素在0.0466～0.2328μg范围

6、内线性良好，其回归方程为Y＝74939.86X＋243.40，r＝0.9999。　　2.6样品溶液的稳定性实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10μl，分别于配制后0，2，4，8，17，26h，依法测定，结果表明，在26h内基本稳定，补骨脂素RSD为1.16%，异补骨脂素RSD为1.70%。　　a对照品b样品c色谱图　　1.补骨脂素2.异补骨脂素　　图1色谱图（略）　　2.7精密度实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差RSD为0.42%，异补骨脂素

7、相对标准偏差RSD为0.39%。　　2.8重复性实验按正文方法，对同一批号(批号为040106)样品5份进行测定，求得补骨脂素平均含量0.0136mg/ml，相对标准偏差RSD为1.98%；异补骨脂素平均含量0.0141mg/ml，相对标准偏差RSD为1.63%。　　2.9回收率实验采用加样回收法，精密量取已知含量的同一批号样品(批号040106，含量补骨脂素为0.0136mg/ml，异补骨脂素为0.0141mg/ml)5ml，精密加入补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，按正文供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件

8、测定，结果见表1～3。　　表1补骨脂素回收率（略）　　表2补骨脂素回收率（略）　　2.10样品测定按正文方法，测定十批样品，结果见下表。　　表3样品中补骨脂素与异补骨脂素含量测定结果（略）　　3讨论　　3.1流动相的确定曾采用甲醇水(80∶20)，(70∶30)，(60∶40)，补骨脂素与异补骨脂素峰为一个峰，无法分离，采用甲醇－水(40∶60