pdtc对压力负荷过度诱导小鼠心肌肥大的防护作用及其机制研究论文

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1、PDTC对压力负荷过度诱导小鼠心肌肥大的防护作用及其机制研究论文.freelechanismofPDTConthedevelopmentofcardiachypertrophyinvivo.MethodsPVB/Nmiceployedandcardiachypertrophyobilityshiftassay(EMSA)ineNFkBbindingactivityhearttissues；SA）方法。本实验中NF-κB同序寡核苷酸探针如下：3′-TCAACTCCCCTGAAAGGGTCCG-5′；5′

2、-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3′，采用T4寡核苷酸激酶法以γ-32P-ATP（3000Ci/mmol）标记探针。核蛋白-DNA探针结合反应体系为：等量核蛋白提取物（30μg），35fmols［γ-32p］标记的双链NF-κB寡核苷酸，反应总体积为15μl。室温静置20min后加入加样缓冲液，经6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。干胶后，-80℃放射自显影，图像采用Bio-Rad公司的phosphor-图像分析系统进行定量分析。(4)APK)、钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶(Calciu

3、mcalmodulin-dependentproteinkinases，CaMK)、磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(PKB，proteinkinaseB，Akt)和核因子-κB（nuclearfactorkappaB，NF-κB）等［2，3，7］。以体外培养心肌细胞为模型的研究和我们的动物在体实验表明NF-κB信号通路在心肌肥大的发生发展中起着关键作用［2，3，5］。但目前仍不清楚在心肌肥大发生发展过程中NF-κB是如何被激活的。NF

4、-κB是Rel蛋白家族成员，主要由p50和p65（RelA）两个亚单位组成。NF-κB结构中都有约300个氨基酸组成的Rel同源区，内含与DNA结合、二聚体化及核易位有关的关键序列。在绝大多数细胞中，NF-κB二聚体与抑制蛋白IκB结合，以无活性的形式存在于胞浆中。NF-κBp65（RelA）的磷酸化与NF-κB核易位和活化密切相关。近年来的研究发现糖原合成激酶-3β(GlycogenSynthaseKinase-3β，GSK3β)可以影响NF-κBp65（RelA）亚单位的磷酸化，从而抑制NF-κB

5、活化［8］。因此我们推测GSK-3β可以通过调控NF-κB活性而参与心肌肥大的发生发展。在本研究中，我们观察到缩窄主动脉弓的小鼠心肌组织中，NF-κB的结合活性显著升高，同时GSK3β（Ser9）磷酸化水平也明显增加。Hardt等也发现GSK3β激酶在正常情况下，可抑制细胞的生长，当GSK3βSer9被磷酸化后，GSK3β激酶的活性降低，从而解除其对细胞生长的抑制作用而促进心肌肥大的发展［9］。PDTC是具有抗氧化作用的稳定化合物，被广泛用于抑制NF-κB活性，但其抑制NF-κB激活的机制尚未阐明。有

6、研究报道PDTC通过其抗氧化作用抑制NF-κB活性［4，5］，但Hayakayotrophin-inducedcardiachypertrophy.JCellBiol，2002，159：1019-1028.2PurcellNH，MolkentinJD.IsnuclearfactorBanattractivetherapeutictargetfortreatingcardiachypertrophy.Circulation，2003，108：638-640.3李跃华，哈团柱，陈琪，等.MyD88依赖性N

7、F-κB信号途径在心肌肥大发生过程中的调控作用.中华医学杂志，2005，85：267-272.4SarkarA，SreenivasanY，RameshGT，etal.Beta-D-glucosidesuppressestumornecrosisfactor-inducedactivationofnucleartranscriptionfactorkappaBbutpotentiatesapoptosis.JBiolChem，2004，279：33768-81.5DechendR，FiebelerA，P

8、arkJK，etal.AmeliorationofangiotensinII-inducedcardiacinjurybya3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzymeAreductaseinhibitor.circulation，2001，104：576-581.6HayakaotoI，etal.EvidencethatreactiveoxygenspeciesdonotmediateNF-kappaBactivation.EM