大孔吸附树脂富集大蓟中总黄酮类成分的工艺研究

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1、大孔吸附树脂富集大蓟中总黄酮类成分的工艺研究【摘要】目的筛选适合分离和纯化大蓟总黄酮的大孔吸附树脂并确立纯化工艺参数。方法以吸附及解吸率为指标考察4种型号的树脂，确定纯化大蓟黄酮的最佳树脂。并通过单因素分析考察该树脂分离、纯化大蓟总黄酮的最佳工艺条件。结果AB8吸附率及解吸率均高于其他3种树脂。其具体工艺条件为控制上样浓度5.2mg/ml、流速0.5ml/min，上样体积3.5BV，洗脱剂浓度为80%，洗脱剂用量10BV。结论AB-8型树脂在所确定的工艺条件下，纯化大蓟总黄酮效果良好，总黄酮得率可达近90%。【关键词】大蓟总黄酮大孔吸附树脂　　StudyontheSeparat

2、ionandPurificationofTotalFlavonefromHerbCirsiijaponicibyMacroporousAbsorptionResin　　Abstract:ObjectiveToselectthesuitableresinandestablishtheoptimalconditionsforseparationandpurificationoftotalflavonefromherbCirsiijaponici.MethodsTodeterminetheoptimalonebyinspectionoffourtypesofmacroporousres

3、in.Theoptimalprocessofpurificationaltechnologicalconditionspleconcentrationg/ml，flol/min，samplevolumejaponicumFisch.exDC．的干燥地上部分或根，具有凉血止血、祛淤消痈的功能［1］。大蓟中含有多种化学成分［2］：黄酮、黄酮苷、生物碱、挥发油和谷甾醇等，其中黄酮类化合物柳穿鱼叶苷为主要止血活性成分［3］。大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构和选择性吸附功能的高分子材料，大孔吸附树脂分离技术从20世纪70年代末冯孝章等人对天麻化学成分的研究开始，目前已广泛用于中药活性成分

4、如黄酮、皂苷、生物碱、苷类等成分的分离与纯化。本实验通过对4种不同型号大孔吸附树脂进行筛选，确定AB-8型树脂对大蓟黄酮有较高吸附及解吸率并通过实验确定了利用该大孔树脂分离纯化大蓟黄酮的最佳工艺条件。　　1试药与仪器大蓟提取液（自制）；芦丁标准品(中国药品生物制品鉴定所，含量测定用，批号0080-9705)；D101型、AB-8型、RAR-9型及HPD一450型树脂(陕西蓝深吸附交换材料有限责任公司生产)；U-3000紫外分光光度计（日本HITACHI公司）。化学试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。　　2方法与结果　　2.1对照品的制备精密称取芦丁对照品0.02014g,置100ml容

5、量瓶中,加60%乙醇适量，振摇溶解后稀释至刻度，摇匀即得。　　2.2样品的制备　　取大蓟药材适量，用6倍量70%乙醇回流提取两次，2h/次，回收乙醇，过滤，加水定容至1000ml，静置24h，备用。　　2.3芦丁对照品标准曲线的绘制［4］　　分别取上述芦丁标准溶液0，0.5，1，2，3，4，5ml于10ml容量瓶中，加入0.6ml5%NaNO2溶液，摇匀。静置6min，加入0.6ml10%Al(NO3)3溶液，摇匀，6min后加入3ml8.6%NaOH溶液，摇匀．用60%乙醇稀释定容至刻度，于波长505nm处比色测定(以零管为空白)。结果见图1。　　2.4总黄酮含量的测定　　准确

6、量取1ml样品于10ml容量瓶中，按“2.3”测定其在505nm处的吸光度。然后在芦丁标准曲线上查出相应的类黄酮含量。测试液中总黄酮的含量按以下公式计算：总黄酮浓度Po=y式中：y为芦丁标准曲线上相应的浓度（mg/ml）。　　2.5树脂的预处理　　用重蒸水洗去细小树脂及破碎树脂，湿法装柱后，用高于树脂层10cm的无水乙醇浸泡24h，放出浸液，继续用无水乙醇冲洗至洗出液加水(1∶5)不出现浑浊，再用重蒸水洗至无醇味，备用。　　2.6树脂的筛选　　2.6.1静态吸附行为考察　　分别称取已处理好的4种型号的树脂：AB-8，RAR-9，D101及HPD450型大孔吸附树脂各2.00g（湿

7、重）于100ml具塞三角瓶中，加入样品溶液30ml，20℃下振摇2h，静置24h过滤，吸取过滤后样品液按2.4法测定吸附平衡后溶液中总黄酮浓度。按下式计算静态饱和吸附量及吸附率。结果见表1。静态吸附容量E=(Po-Pa)Va/M(单位：mg/g)吸附率s=(Po-Pa)/Po式中：Po---样品溶液中总黄酮的初始浓度：mg/ml；Pa--吸附平衡后溶液中总黄酮浓度：mg/ml；Va：样品液体积(ml)M：树脂量（g）　　2.6.2静态洗脱行为考察　　取上述经静态饱和吸附总黄酮后滤