大鼠脑干星形胶质细胞和神经元对一侧胫腓骨骨折后的即刻应激反应及其相互关系论文

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1、大鼠脑干星形胶质细胞和神经元对一侧胫腓骨骨折后的即刻应激反应及其相互关系论文.freelin的表达变化.结果①一侧胫腓骨骨折后，脑干星形胶质细胞GFAP阳性表达有明显的核团定位.在延髓内脏带（MVZ）、三叉神经脊束核尾侧亚核（Vc）、外侧楔束核（Ecu）、中缝大核（RMg）、蓝斑（LC）、臂旁外侧核（LPB）、中缝背核（DR）、中脑导水管周围灰质腹外侧区（vIPAG）等脑区内的星形胶质细胞GFAP阳性，而Fos阳性神经元的分布与此分布基本一致;②MVZ，LC等部位有大量Fos及TH双标阳性神经元，周围有密集的GFAP阳性细胞;③时间点上GFAP与Fos阳性产物的表达均先升高后又降低.

2、freelin，而后者在90min，即前者表达高峰略为提前.结论上述核团的星形胶质细胞参与了下肢骨折伤害性刺激的应激反应及其调节过程，且其反应早于神经元，可能主动地影响神经元的活动.Abstract:AIMToobservetheinstantstressreactionofas-trocytesandneuronsinratbrainstemsaftertheunilateraltibiaandfibulabonefracture.METHODSVZ），raphemagnusnucleus（RMg），lateralparabrachialnucleus（LPB），locusnucl

3、eus（LC），dorsalraphenucleus（DR），lateralventralpartofperiaqueductalgray（vlPAG）.Fos-likeimmunoreactiveneuronshadthesimilardistributionpattern.②ThereanyFosandTHimmunoreactivedoublelabelledneuronsinMVZ，LC，vl-PAG，DR，surroundedbyGFAP-likeastrocytes.③Fos-like（Fos-LI）andGFAP-like（GFAP-LI）immunoreactivit

4、ybothe.ThepeaktimeofGFAP-LIaybeinvolvedinthestressresponseandadjustmentoftheloitybonefracturenociceptionsimultaneously.0引言传统观点认为痛觉是由神经元介导的，胶质细胞只起辅助作用.然而随研究不断深入，现已证实星形胶质细胞（astrocyte，AS）能够接受神经元的信息，在AS之间传递，并通过释放谷氨酸反作用于神经元从而对其功能发挥影响［1，2］.目前有关胶质细胞对痛觉反应的研究开始有较多报道，但多采用sc化学刺激物的模型进行研究［3，4］，对外伤引起的即刻应激反应中

5、AS对痛觉的反应及其与神经元的关系则未见报道.我们采用一侧胫腓骨骨折模型，通过免疫细胞化学等方法对刺激后AS和神经元反应的时间、空间规律及相互关系进行了探讨.1材料和方法1.1材料SD成年雄性大鼠32只，体质量200～250g（由第四军医大学实验动物中心提供），在温暖（20℃）、安静的环境中饲养48h，注意避免非特异性应激反应的发生.1.2方法1.2.1实验组将大鼠在清醒状态下造成一侧胫腓骨骨折，分别存活15，45，90，180和360min（n=6）后，用过量戊巴比妥钠（80mgkg-1，ip.）麻醉，迅速开胸经左心室至升主动脉插管，以100mL生理盐水冲去血液，4℃含40gL-1

6、多聚甲醛的0.1molL-1磷酸盐缓冲液（PB，pH7.4）先快后慢灌流固定2h，取脑干置于300gL-1蔗糖中（4℃）直至组织沉底.冰冻切片机连续冠状切片，片厚30μm，分为4组，置于0.01molL-1PBS中存放.免疫组织化学染色如下:每只大鼠的切片按先后次序分为4组，分别行抗Fos、抗GFAP、Fos/GFAP双标及Fos/GFAP/TH三标的免疫组织化学染色.下面以三标为例简述染色过程.切片在0.01molL-1PBS中漂洗后，入含3gL-1Tri-tonX-100的0.01molL-1PBS中浸泡30min（室温）.依次入①兔抗Fos抗体稀释液（13000，SantaCr

7、uz），孵育48h（室温）;②生物素标记的羊抗兔IgG（1500，Sigma）放置2h（室温）;③生物素-卵白素-HRP复合物（ABC，1500，Sigma）浸泡2h（室温）.用葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵法呈色.以上每一步骤之后均用0.01molL-1PBS液充分漂洗3次，每次10min（下同）.显色后，切片继续用ABC法进行抗GFAP染色:①兔抗GFAP抗体稀释液（13000，Dako）孵育24h（室温）;②生物素标记的羊抗兔IgG（1500，Sig