大鼠下丘脑星形胶质细胞对不同时段睡眠剥夺的反应

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1、大鼠下丘脑星形胶质细胞对不同时段睡眠剥夺的反应作者:惠雪枫，宿长军，李柱一，饶志仁，张润宁【关键词】下丘脑Responseofastrocytesinrathypothalamustosleepdeprivationofdifferenttimeperiod　　【Abstract】AIM:Toexploretheresponseofastrocytesinrathypothalamustosleepdeprivationofdifferenttimeperiod.METHODS:FortyfivemaleSDratslydividedinto3groupsandthen

2、ineachgroup,7ratsonthesmallplatformsovers（TC）and1ratinthenormalcage（CC）.ThenumberofratsrecEivingthesametreatmentmunohistochemistry.RESULTS:TheexpressionofGFAPinhypothalamicnucleichangedalongelengthsofSD.TheexpressionsofGFAPinsuprachiasmaticnucleus（S）andinparaventricularnucleus（Pa）reached

3、thepeaksafter24hSD,inarcuatenucleus（Arc）after48hSDandinsupraopticnucleus（SO）theyincreasedassoonasSDbeganandreachedthepeaks24hlater.CONCLUSION:Itispossiblethatastrocytesparticipateintheregulationofbiologicrhythmofhypothalamicnucleus.　　【Keyus;astrocytes;glialfibrillaryacidicprotein;rats　　【

4、摘要】目的：探索不同时段睡眠剥夺后大鼠下丘脑内星形胶质细胞的反应.方法：雄性大鼠45只随机分为3组，每组内再分3组：睡眠剥夺组7只,采用小环境水平台法建立大鼠睡眠剥夺模型，分别剥夺睡眠3,6,12,24,48,72,96h；与其对应的大平台对照组7只；正常单独笼养组1只.接受同一处理的大鼠各有3只.用免疫组化的方法检测胶原纤维酸性蛋白（GFAP）在下丘脑的表达变化.结果:GFAP在下丘脑核群的表达出现随睡眠剥夺时间长短变化的趋势，在交叉上核和室旁核的表达于24h达在高峰后下降，在弓状核的表达于48h达高峰，在视上核的表达开始即上升，24h达高峰后下降.结论：星形胶质细胞

5、可能参与下丘脑核团的生物节律调节.　　【关键词】睡眠剥夺；下丘脑；星形细胞；神经胶质原纤维酸性蛋白质；大鼠　　　0引言　　下丘脑被认为是睡眠觉醒节律的中枢发生部位，与神经系统其他部位存在广泛的联系，它作为神经内分泌中心又调控着某些激素的分泌节律.睡眠剥夺（sleepdeprivation,SD）即限制受试者的睡眠时间至正常需要量以下.近年来SD对机体的影响备受人关注，但关于SD与神经胶质细胞关系的研究很少.本研究采用免疫组织化学的方法，观察不同时段SD后下丘脑内GFAP的改变，探讨星形胶质细胞（astrocyte,AS）对SD的反应以及其在睡眠调节中的作用.　　1材料和

6、方法　　1.1材料　　成年、雄性、健康上海产SpragueDag/kg）麻醉，开胸经升主动脉灌注生理盐水100mL快速冲洗全身组织血液，随后灌注冷的（4℃）40g/L多聚甲醛（pH7.4）500mL，先快后慢持续60~90min.灌注结束后取全脑置于200g/L蔗糖磷酸缓冲液（pH7.4）中，4℃冰箱保存至组织块沉底.用恒冷箱切片机做连续冠状冰冻切片，片厚30μm，隔5取1，切片收集于0.01mol/LPBS中.　　1.2.2免疫组织化学染色切片分为2组：第1组：抗GFAP免疫组化反应（ABC法）：室温下，切片用3g/LTritonX100液孵育30min；入兔抗GFA

7、P抗体稀释液（1∶3000,Sigma）孵育24h；生物素标记的羊抗兔IgG（1∶500,Sigma）孵育2h；生物素卵白素HRP复合物，ABC（1∶500,Sigma）孵育2h；最后用葡萄糖氧化酶DAB硫酸镍胺法显色.以上每一步骤之后均用0.01mol/LPBS充分漂洗3次，每次10min；DAB显色前后各用蒸馏水快速冲洗脑片3次.第2组：用PBS替代GFAP抗体，再按ABC法进行免疫组化染色，结果为阴性.　　1.2.3结果判定主要采用显微镜下计数下丘脑各核团GFAP阳性细胞的数量并结合细胞形态的改变如细胞深染、胞体变大和突起变粗来判定