粘质沙雷氏菌胞外核酸酶重组表达纯化及鉴定

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1、-ThesisSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityfortheDegreeofEngineeringMasterEXPRESSION,PURIFICATIONANDCHARACTERIZATIONOFRECOMBINANTSERRATIAMARCESCENSNUCLEASEM.D.Candidate：Jun-jieCaiSpeciality：BioengineeringSupervisor（I）：Rong-xiuLiSupervisor（II）：Gao-xiaZhangSch

2、oolofLifeSciencesandBiotechnologyShanghaiJiaoTongUniversityShanghai,ChinaDecember2010---------上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：

3、年月日---上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日---上海交通大学工程硕士学位论文摘要粘质沙雷氏菌胞外核酸酶重组表

4、达纯化及鉴定摘要根据粘质沙雷氏菌胞外核酸酶（strainSM6）（以下简称SMnucA）氨基酸序列设计了优化的表达基因DNA序列，构建SMnucA-pET43.1a表达载体，转化入大肠杆菌BL21(DE3)宿主后，通过IPTG诱导,表达出包涵体形式的SMnucA蛋白。包涵体蛋白经过清洗溶解、层析纯化、复性后，经SDS-PAGE分析显示，其分子量约为26kD，与预期分子量一致。降解DNA的实验证实,重组粘质沙雷氏菌胞外核酸酶能够有效降解DNA，具有与文献报道接近的生物活性。关键词：粘质沙雷氏菌胞外核酸酶，基因构建，

5、蛋白表达，生物活性---I---上海交通大学工程硕士学位论文ABSTRACTGENECONSTRUCTION,EXPRESSION,PURIFICATIONANDCHARACTERIZATIONOFRECOMBINANTSERRATIAMARCESCENSNUCLEASEABSTRACTTheexpressiongeneofSerratiamarcescensnuclease(strainSM6)isconstructedtovectorSMnucA-pET43.1aaccordingtotheaminoacid

6、sequence.TheexpressionvectorSMnucA-pET43.1aistransformedintoE.coliBL21(DE3)andSMnucAproteinisexpressedasinclusionbodiesunderIPTGinduction.Afterpurification,theenzymeisrefolded.ItisshownintheSDS-PAGEanalysisthattherelativemolecularmassofSMnucAis26kDwhichiscons

7、istentwiththetheoreticalpredictedweight.TheenzymaticactivityoftherefoldedSerratiamarcescensnucleaseisconfirmedthroughDNAdegradationexperiment.Theenzymaticactivityisconsistantwiththatinthepublication.KEYWORDS:Serratiamarcescensnuclease,geneconstruction,protein

8、expression,biologyactivity---II---上海交通大学工程硕士学位论文目录目录第一章绪论.........................................11.1课题的来源....................................................................11.2国内外研究的现状