tat ptd┐bcr-abl sh3融合蛋白对白血病细胞系k562凋亡诱导作用论文

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1、TATPTD┐BCR/ABLSH3融合蛋白对白血病细胞系K562凋亡诱导作用论文.freelolL-1的PTD-BCR/ABLSH3融合蛋白对K562细胞生长有抑制作用，浓度越高，抑制作用越强;苔盼蓝拒染法、细胞形态学、电镜超微结构、TUNEL原位杂交和FCM检测的观察证明，PTD-BCR/ABLSH3融合蛋白可引起K562细胞的凋亡和坏死;FCM检测显示该融合蛋白可将细胞阻滞在G2/M期.结论PTD-BCR/ABLSH3融合蛋白进入K562细胞后可引起细胞凋亡和坏死，导致细胞增殖抑制.这一结果可能为慢性粒细

2、胞性白血病（CML）的治疗提供一种新的治疗策略.Keyain;fusionprotein;leukemia;apoptosisAbstract:AIMToinvestigatetheeffectofgeicre-binedHIV-1TATproteintransductiondomain（PTD）andBCR/ABLSH3domain（PTD-BCR/ABLSH3）fusionproteinonthecellproliferationandapoptosisofK562leukemiacelllineafte

3、ritstransductionintoK562cells.METHODSThemorphology，apoptosisandcellcycleofK562cellseansoftrypan-bluetropchromecells，flo-etry.freelissionelectronmicroscopy，confocallaserscan-ningmicroscopyandtunelinsituhybridizationtoinvestigatethechangesofcellproliferationa

4、fterPTD-BCR/ABLSH3fusionproteinculturedolL-1PTD-BCR/ABLSH3fusionproteininhibitedtheproliferationofK562cellsandthehighertheconcentrationoffusionprotein，thestrongertheinhibitoryeffectstoofferaneyelogenousleukemia（CML）.0引言BCR/ABL融合蛋白是一种与慢性粒细胞性白血病（CML）和部分急性淋巴细胞

5、白血病（ALL）发生有关的特异性癌蛋白，由9号与22号染色体易位t（9∶22）（Ph染色体）形成的bcr/abl融合基因编码，BCR/ABL蛋白具有很高的蛋白酪氨酸激酶活性，在白血病转化过程中发挥着关键性的作用［1-2］.SH3结构域是由50多个氨基酸残基组成，存在于多种蛋白酪氨酸激酶的结构中，在c-ABL，BCR/ABL及多种转接蛋白（Adapter）和信号转导分子中含有SH3结构域，参与激酶活性的调节及信号转导［1-7］，已经证明c-ABL蛋白的SH3域是ABL蛋白酪氨酸激酶的负性调节域［8-10］，但在

6、白血病性BCR/ABL蛋白中，SH3的结构的作用仍不完全清楚.蛋白转导域（proteintransductiondomainS，PTDs）是指具有能介导蛋白质跨膜转运的某些蛋白质的结构域.已经证明HIV-1的反式激活蛋白TAT的蛋白转导结构域（proteintransductiondomain，PTD）能将不同大小的蛋白质（Mr15×103～20×104）跨膜转导入细胞质内［11-13］，这一方法为将具有生物活性的蛋白导入细胞内提供了一项有用的技术.本研究利用PTD的蛋白转导作用，将BCR/ABLSH3域多肽

7、模块直接导入白血病细胞系（K562）细胞中，通过细胞形态学、电镜及TUNEL等技术，证明了PTDBCR/ABLSH3融合蛋白具有抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用.1材料和方法1.1材料PTD-BCR/ABLSH3融合蛋白为本实验室已表达和纯化的基因重组产品，方法见文献［11］，K562细胞由本室保存，TUNEL凋亡检测试剂盒购自宝灵曼公司.实验分对照组和处理组，处理组根据PTD-BCR/ABLSH3融合蛋白的浓度不同又分为:10μmolL-1组;5μmolL-1组;1μmolL-1组和0.5μmolL-1组

8、.1.2方法1.2.1细胞培养人慢性粒细胞白血病细胞系（K562）培养在含体积分数为100mLL-1的小牛血清的RPMI1640培养液中，37℃，50mLL-1的CO2条件下培养，每周换液2次，实验用对数生长期细胞，各组在培养不同时间后收集细胞观察，台盼蓝拒染法（trypan-blueexclusion）判断细胞活力，倒置显微镜下观察细胞生长，并用细胞涂片仪（500rmin-1，4min）制片，瑞氏