大孔吸附树脂分离纯化枫香槲寄生总黄酮的工艺研究

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1、大孔吸附树脂分离纯化枫香槲寄生总黄酮的工艺研究作者：钟世顺许雄伟曾德贵李健新【摘要】目的研究大孔吸附树脂富集纯化枫香槲寄生总黄酮的最佳工艺参数。方法以枫香槲寄生总黄酮吸附量为指标，通过正交实验考察确定了该树脂分离纯化总黄酮的工艺条件。结果AB-8型树脂对枫香槲寄生总黄酮有良好的吸附分离性能，其吸附分离工艺条件为：上样浓度为2.55mg·ml-1，上样液pH为3，吸附流速为3BV·h-1，洗脱剂为60%乙醇。结论AB-8型大孔吸附树脂在所确立的工艺条件下，纯化枫香槲寄生总黄酮效果良好，总黄酮纯度可达60%左右。【关

2、键词】枫香槲寄生总黄酮大孔吸附树脂Abstract：ObjectiveToexploretheoptimalconditionforpurificationoftotalflavonoidsfromViscumliquiddambaricolumHayata.acroporousresin.MethodsTheprocesstechnologyforpurificationoftotalflavonoidsacroporousresinacroporousresinoumabsorptionandelutiona

3、bility.Theoptimumabsorptionconditionspleconcentration2.55mg·ml-1,pH3,thecurrentvelocity3BV·h-1,theeluant60%ethanol(5BV).ConclusionTheAB-8macroporousresincanbeusedtopurifytotalflavonoidsfromViscumliquiddambaricolum,thepurityoftotalflavonoidsisabout60%.Keyliqui

4、ddambaricolumHayata;Totalflavonoids;Macroporousresin枫香槲寄生ViscumliquiddambaricolumHayata.系桑寄生科槲寄生属植物，本植物草药名“枫树寄生”，具有祛风除湿、舒筋活络等功效［1］。我们的前期研究发现，从枫香槲寄生中获得的以两个新的色原酮化合物为代表的黄酮类成分具有较明显的增加冠脉流量，减慢心率和增加心肌收缩力的作用，显示了对心血管疾病的显著活性［2］。为此，分离纯化获得高纯度的槲寄生总黄酮是进行槲寄生开发的关键步骤。大孔吸附树脂近年

5、来已广泛应用于天然植物中活性成分，如皂苷、黄酮、生物碱等的提取分离［3］，本实验采用大孔树脂对槲寄生总黄酮进行富集。现将结果报道如下。1仪器与试药1.1仪器岛津UV-2201型紫外可见光分光光度计；SartoriusBP201型电子天平；DKZ恒温水浴摇床。1.2试药芦丁对照品（中国药品生物制品检定所提供，含量测定用）；枫香槲寄生药材，购自广州清平药材市场并经广东药学院罗集鹏教授鉴定为枫香槲寄生ViscumliquiddambaricolumHayata.；大孔树脂（型号分别为AB-8，DA-201，D-101，

6、均为净品级，天津海光化工有限公司）；NaNO2，Al(NO3)3，NaOH等试剂均为分析纯。2方法与结果2.1含量测定2.1.1标准曲线的制备精密称取经五氧化二磷干燥恒重的芦丁对照品10mg，用60%乙醇溶解并定容至100ml，摇匀备用。精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml于10ml容量瓶中，加入60%乙醇至6ml，加入5%NaNO20.3ml，摇匀，再加入10%Al(NO3)30.3ml，摇匀，放置5min后加入4%NaOH3ml,用60%乙醇定容至刻度，混匀后放置5min；同法

7、以60%乙醇加随行试剂作空白在510nm处测定吸光度［4］。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：A=11.162C-0.0056，r=0.9998(n=6)，线性范围为10～50μg·ml-1。2.1.2枫香槲寄生药材总黄酮的含量测定精密称取枫香槲寄生粗粉5.0g，分别加入60%乙醇40ml，浸泡0.5h后置水浴中回流提取2次，2h/次，提取液滤过、合并，60%乙醇定容至100ml。精密吸取提取液1.0ml置于10ml刻度试管中，按标准曲线制备项下方法测定吸光度，计算出枫香槲寄生中总黄酮含量为（10.75

8、±0.47）mg·g-1(n=5)。2.2大孔吸附树脂纯化工艺考察2.2.1大孔吸附树脂的预处理因采用净品级树脂，采用乙醇湿法装柱，用乙醇流动清洗，不时检查流出液至与水混合（1∶5）不呈白色浑浊为止，然后以大量纯化水洗去乙醇至流出液无醇味。2.2.2上柱液的制备称取枫香槲寄生粗粉，分别加入8倍量60%乙醇回流提取2次，2h/次，提取液滤过、合并，水浴蒸干至无醇味，加入适量