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1、脑微透析探针置入对透析样品的影响【摘要】目的探讨微透析探针置入的刺激对大鼠纹状体内谷氨酸水平的影响。方法通过初次和二次置入微透析探针至大鼠纹状体并收集脑微透析液,结合高效液相色谱法检测透析液谷氨酸水平。结果探针初次置入纹状体谷氨酸水平立即升高约30倍,3h后降至基础值;二次置入时谷氨酸仅升高约15倍,1h后即降至基础值。结论微透析探针置入的刺激可引起大鼠纹状体内谷氨酸水平短暂增高,在脑微透析检测谷氨酸样品时应注意探针置入的影响。【关键词】脑;微透析;谷氨酸;高效液相色谱ABSTRACT:Objecti
2、veToinvestigatetheinfluenceofglutamatelevelsinratstriatumafterintracerebralimplantationofmicrodialysisprobe.MethodsMicrodialysisprobebyone-timeorteinsertions.Dialysateatelevelsanceliquidchromatograph(HPLC).ResultsTheinsertionofmicrodialysisprobeintostri
3、atumatfirsttimeresultsinatransientraiseinglutamate(about30-foldabovebaseline),anddeclinedtobaselineatelevelsicrodialysisproberEinsertintostriatum,anddroppedtobaselineplanttraumamaycausetransientglutamateperturbationsinratstriatum.Thus,theinfluenceofprob
4、eimplantationfordetectingglutamatesamplesbyintracerebralmicrodialysisneedtobeconsidered.KEYA公司);高效液相色谱分析仪(美国erck公司,HPLC级色谱纯);氯胺酮、流动相试剂等均为国产分析纯;实验用水为Millipore超纯水。1.2方法1.2.1样品收集大鼠麻醉后,将其头部固定在脑立体定位仪上,根据大鼠脑立体定位图谱［4］置入微透析引导管至右侧纹状体(以SD大鼠,LB9.0mm,前囟标准AP+1.0mm,M
5、L-2.5mm,DV+4.0mm进行标化)。1.2.1.1探针初次置入动物静养3d后,将引导管内芯拔出,置入微透析探针,以2μL/min灌注Kreb’s-Ringers液(140mmol/LNaCl,4mmol/LKCl,1.2mmol/LCaCl2,1mmol/LMgCl2,pH7.4),从置入当时(0h)开始,每隔1h收集1管脑微透析液至5h,待收集完毕以0.2μL/min维持,24h后再以2μL/min收集脑微透析液3管,结束实验;探针拔出,置灭菌废弃微透析探针,动物回笼静养。1.2.1.2探针
6、二次置入动物继续静养3d后,将引导管内的废弃微透析探针拔出,重新置入新探针,以2μL/min灌注Kreb’s-Ringers液,分别收集0～5h及24h后脑微透析液(过程同1.2.1.1),每管透析液收集10min。1.2.2色谱分析用邻苯二甲醛(OPA)进行谷氨酸的柱前衍生,以单泵恒流洗脱,流速0.9mL/min,柱温30℃,流动相为:0.1mol/L磷酸氢二钠,1mmol/LEDTA和25%甲醇,pH6.4;荧光检测器激发波长330nm,发射波长420nm。取微透析样品中某一成分峰保留时间与标准溶
7、液相应峰的保留时间一致者作为该样品的谷氨酸峰。1.2.3探针回收率测定新探针激活后置于谷氨酸标准液(0.1mmol/L)中,以2μL/min持续灌注Kreb’s-Ringers液,平衡1h后收集体外透析液3管。取HPLC检测体外透析样品谷氨酸平均峰面积(Am)与标准液谷氨酸峰面积(As),计算各探针的相对回收率:R＝Am/As×100%1.3统计学处理新探针回收率及谷氨酸检测值占基础值的百分比视为记量资料,以x±s表示,全部数据以SPSS13.0软件统计分析。2结果2.1新探针体外相对回收率各新探针体
8、外相对回收率为(22.36±4.48)％。2.2HPLC检测谷氨酸色谱图以探针置入大鼠纹状体24h后安静时为基础状态，测得谷氨酸基础值约为3μmol/L(n＝10)(图1)。图1高效液相色谱检测纹状体透析液中谷氨酸基础值Fig1HPLCtraceofabasalstriataldialysatesampleshoate2.3纹状体内谷氨酸随探针置入时间的变化探针初次置入时谷氨酸立即较基础值增高约30倍,经3h降至基础水平;二次置入时增高约15倍,1h后降
