x连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达

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1、X连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达作者：夏春波周思蒋常文刘健翔何丽霞　兰羚元【摘要】目的探讨XIAPmRNA表达在子宫颈癌发生发展过程中的作用。方法通过HE染色从组织病理学上确定子宫颈组织的良、恶性以及恶性组织的分级和分期。应用RTPCR法检测43例子宫颈癌组织和15例慢性子宫颈炎组织中XIAPmRNA的表达情况。结果子宫颈癌组织XIAPmRNA表达的阳性率为88.37%，明显高于慢性子宫颈炎组织(46.67%)，两者差异显著(P<0.01)。XIAPmRNA表达随分化程度降低而升高(P&l

2、t;0.01)，有淋巴转移的患者高于无淋巴转移的患者(P<0.05);子宫颈癌组织XIAPmRNA表达与患者年龄、病理分期无关(P>0.05)。结论XIAP与子宫颈癌发生发展有密切关系;其表达水平的检测对子宫颈癌的病理诊断及其分级有参考价值。【关键词】子宫颈癌;XIAP基因;RTPCRX连锁凋亡抑制蛋白(XlinkedinhibitorofapoptosisprotEin，XIAP)是最有效力的caspase抑制物之一，可通过多种途径介导细胞凋亡，近年来发现XIAP蛋白在多种肿瘤中高表达

3、,与肿瘤的分化程度及预后有关，已成为肿瘤基因治疗的新靶点和研究热点〔1，2〕。为此，本实验采用RTPCR法检测子宫颈癌组织和慢性子宫颈炎组织中XIAPmRNA表达情况，以探讨XIAP基因在子宫颈癌发生发展中的作用。　　1材料与方法　　1.1标本来源标本来自2006年3月～2007年11月桂林医学院附属医院妇产科门诊，资料收集均取得患者同意，标本大小约为0.5cm×0.5cm×0.5cm。43例子宫颈癌组织均未行化疗或放疗，包括子宫颈癌G1级11例、G2级23例、G3级9例。临床分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期7例，

4、Ⅲ期16例，Ⅳ期14例。有淋巴转移的13例，无淋巴转移的30例。年龄30～61(平均48)岁，其中50岁以上19例，50岁以下24例。另外取慢性子宫颈炎组织15例作为对照。所有标本均经HE染色证实诊断。标本获取后立即放置到液氮容器内暂时保存，之后转移到-80℃低温冰箱中保存。　　1.2主要试剂Trizol试剂购自Invitrogen公司，RandomPrimers及RTPCRKit(K1003S)均购自Promega公司。引物根据NCBI基因库中提供的XIAP(U45880)、βactin(AY582

5、799)cDNA序列，采用引物分析软件PrimerPremier5.0分别在XIAP、βactin基因序列上设计引物。XIAP上游引物5′GGTGATAAAGTAAAGTGCTTTCACTGT3′，下游引物5′TCAGTAGTTCTTACCAGACACTCCTCAA3′，产物为188bp;βactin上游引物5′CACCAACTGGGACGACA3′，下游引物5′GCAAAGAACACGGCTAA3′，产物为498bp。βactin、XIAP引物均由北京赛百盛基因公司合成。　　1.3

6、方法　　1.3.1HE染色标本经常规固定、脱水、透明、切片和HE染色从组织病理学上确定子宫颈组织的良、恶性以及恶性组织的分级和分期。　　1.3.2提取组织总RNA在液氮中将标本研磨成粉末，趁液氮尚未挥发光时，将粉末转移到1.5ml离心管中，总RNA的提取根据Trizol试剂说明书进行，抽提的RNA经1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，用紫外分光光度计检测其浓度和纯度。　　1.3.3反转录及PCR反应根据RTPCRKit(K1003S)说明书，将组织总RNA0.5μg和随机引物0.5μg反转录合成相应的cDN

7、A，再以cDNA为模板进行PCR扩增，设置未加cDNA模板的空白对照。PCR反应条件为：预变性94℃5min，变性94℃40s，退火50℃40s，延伸72℃40s，共40个循环，再延伸72℃5min。　　1.3.4PCR产物鉴定取10μlPCR扩增产物加到含有EB的1.5%琼脂糖凝胶上跑电泳，结果通过全自动数码成像分析系统显示，用GeneToolsfromSynGene软件分析其条带光密度，计算XIAP基因与内参照βactin的光密度值的比值，代表XIAPmRNA的相对表达水平。每个标本重复3次，取平均

8、值。　　1.4统计学处理采用SPSS15.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验,计量资料以x±s表示，比较采用方差分析。　　2结果　　2.1XIAPmRNA在慢性子宫颈炎组织和子宫颈癌组织中的表达经过PCR扩增，结果XIAP扩增产物片段为188bp，βactin扩增产物片段为498bp，与引物设计相符合。15例慢性子宫颈炎组织中有7例(46.67%)XIAPmRNA表达阳性;43例子宫颈癌组织中有38例(88.37%)XIA