石蜡切片中bcl┐6抗原失活机制及修复论文

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1、石蜡切片中BCL┐6抗原失活机制及修复论文.freelmunohistochemistry;BCL-6;lymphoproliferationAbstract:AIMTostudytheidealmethodofretrievingtheantigenicactivityofBCL-6inparaffinsectionsandthepossiblemechanismoftheantigenmasking.METHODSParaffin-embeddedsectionsfrom11casesoflymphoidreac-tivehyperplasia:ED-TA.freelcarbona

2、te（SC）anddeionizedethods:highpressure（HP），micromunohistochemistry.RESULTSThepositivepercentageinsectionsretrievedbyEDTA，citrateandSCongthegroupsentionedgroupsethodforretrievingantigenicactivityofBCL-6byformalin-fixa-tive，suggestingthatcalciummaybeinvolvedintheantigenmasking.0引言BCL-6是位于染色体3q27原癌基

3、因bcl-6编码的核内转录因子，由706个氨基酸组成，主要表达于淋巴组织生发中心B细胞及部分T细胞［1］.研究证实，bcl-6剔除鼠不能形成生发中心［2］，其基因调控区发生易位或（和）突变与B细胞淋巴瘤发生有关［3，4］，BCL-6表达失调可引起细胞凋亡及弥漫性大B细胞淋巴瘤发生［5，6］.检测BCL-6表达有助于淋巴瘤的诊断和鉴别诊断［7］.然而，40gL-1甲醛固定后的BCL-6抗原不经修复极难检出.我们用免疫组化方法比较一组反应性增生淋巴组织石蜡切片，分别用EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复机制不同的修复液，结合高压、微波及煮沸3种常用方法的修复效果，探讨BCL-6抗原失

4、活机制及修复的理想方法.1材料和方法1.1材料1.1.1标本来源及处理2000-02/2000-06收集西京医院病理科扁桃体炎标本7例，反应性增生淋巴结标本4例.经40gL-1甲醛固定24h，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，切片置60℃烤箱过夜（切片用APES胶预处理）.1.1.2修复液及配制1mmolL-1pH8.0ED-TA溶液:0.37gEDTA溶于1L蒸馏水，调pH值至8.0;10mmolL-1，pH6.0柠檬酸盐溶液、1.5mmolL-1pH8.0碳酸钠溶液分别参照Cattoretti等［9］及Morgan等［8］的方法配制;去离子水用美国Millipore公司制纯水器生产.

5、1.2方法高压修复参照Norton等［10］方法:1.5L修复液入压力锅中，加热至沸腾.将脱蜡至水切片置于金属架上，浸入锅内修复液中，盖压力锅阀，加热至压力锅喷气后1min，停止加热，冷水浸至室温.微波修复参照Cattoretti等［9］方法:将脱蜡至水切片放入盛有修复液的染缸中，置医用微波炉内中低档加热10min，取出冷却至室温.煮沸修复法:将脱蜡至水切片浸入盛修复液的烧杯中，烧杯置于盛有自来水的铝锅内，电炉上加热，烧杯中温度达97℃后开始计时，15min后停止加热，冷至室温.1.3免疫组化检测及结果判断BCL-6mAb购自英国Novocastra公司，工作浓度1∶20.EnVisi

6、onTM及催化信号扩增（catalyzedsignalamplification，CSA）免疫组化试剂盒购自Dako公司，按说明操作.11份标本各切片13张，分13组.其中一组不修复，用CSA试剂盒检测.另12组用不同的修复液及修复方法修复，运用DakoEnVisionTM两步法检测.TBS替代一抗作阴性对照.阳性强度评价采用半定量方法，阴性不着色（-），淡黄色为阳性（+），棕黄色颗粒或团块为强阳性（）（着色部位位于胞核）.统计学处理:实验结果采用χ2检验.2结果2.1未经修复组检测结果用CSA试剂盒检测未修复组，抗BCL-6免疫组化染色均为阴性（Fig1）.2.2不同方法修复后BCL

7、┐6检测结果经EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复液，分别用高压、微波及煮沸3种修复方法处理后，EDTA组阳性率显著高于柠檬酸组（P0.01），后者又高于碳酸钠组和去离子水组（P0.01）.3种修复方法比较，高压修复阳性率高于微波修复组（P0.05）和煮沸组（P0.01）.且高压修复无组织脱片现象，其他修复方法均有不同程度的脱片（Tab1）.图1－图2略表1不同方法修复后BCL-6检测结果略2.3高压配合不同修复液的修复效果EDTA或柠檬